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產(chǎn)品關(guān)鍵詞:天津七色免疫組化染色服務(wù),免疫組化
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為了在同一張組織切片或細胞學(xué)涂片上同時或先后顯示兩種或兩種以上的抗原,發(fā)展了雙重和多重免疫組化技術(shù)。這對于在原位了解不同抗原的關(guān)系,將形態(tài)與功能相結(jié)合極為有用。
近年來,雙重標(biāo)記技術(shù)結(jié)合了免疫組化和核酸分子雜交技術(shù),已跨越蛋白質(zhì)水平,進入DNA,天津七色免疫組化染色服務(wù)、RNA水平,天津七色免疫組化染色服務(wù),可在同一細胞內(nèi)顯示兩種不同的DNA或mRNA,或者顯示DNA和蛋白質(zhì)。也有人以放射性同位素標(biāo)記和酶組織化學(xué)結(jié)合來顯示靶DNA和抗原,天津七色免疫組化染色服務(wù)。雙重染色的基本方法有雙重?zé)晒夂碗p重酶標(biāo)記法。雙重?zé)晒鈽?biāo)記**常用的是FITC和TMRITC或RB200,雙重酶標(biāo)記常用的是辣根過氧化物酶和堿性磷酸酶。
天津七色免疫組化染色服務(wù)近年來,隨著免疫組織化學(xué)技術(shù)的發(fā)展和各種特異性抗體的出現(xiàn),使許多疑難**得到了明確診斷。在常規(guī)**病理診斷中,5%-10%的病例單靠H.E.染色難以作出明確的形態(tài)學(xué)診斷。尤其是免疫組化在**診斷和鑒別診斷中的實用價值受到了普遍的認可,其在低分化或未分化**的鑒別診斷時,準(zhǔn)確率可達50%-75%。免疫組織化學(xué)的臨床應(yīng)用主要包括以下幾方面:⑴惡性**的診斷與鑒別診斷;⑵確定轉(zhuǎn)移性惡性**的原發(fā)部位;⑶對某類**進行進一步的病理分型;⑷軟組織**的zhiliao一般需根據(jù)正確的組織學(xué)分類,因其種類多、組織形態(tài)相像,有時難以區(qū)分其組織來源,應(yīng)用多種標(biāo)志進行免疫組化研究對軟組織**的診斷是不可缺少的;⑸發(fā)現(xiàn)微小轉(zhuǎn)移灶,有助于臨床zhiliao方案的確定,包括手術(shù)范圍的確定。⑹為臨床提供zhiliao方案的選擇。天津多色熒光免疫組化
抗體和抗原之間的結(jié)合具有高度的特異性,免疫組織化學(xué)正是利用了這一原理。先將組織或細胞中的某種化學(xué)物質(zhì)提取出來,以此作為抗原或半抗原,通過免疫動物后獲得特異性的抗體,再以此抗體去探測組織或細胞中的同類的抗原物質(zhì)。由于抗原與抗體的復(fù)合物是無色的,因此還必須借助于組織化學(xué)的方法將抗原抗體結(jié)合的部位顯示出來,以其達到對組織或細胞中的未知抗原進行定性,定位或定量的研究。免疫組織化學(xué)技術(shù)按照標(biāo)記物的種類可分為免疫熒光法、免疫酶法、免疫鐵蛋白法、免疫金法及放射免疫自顯影法等。這些常用免疫組織化學(xué)方法的原理如下:免疫熒光細胞化學(xué)技術(shù)將已知抗體標(biāo)上熒光素,以此作為探針檢查細胞或組織內(nèi)的相應(yīng)抗原,在熒光顯微鏡下觀察.當(dāng)抗原抗體復(fù)合物中的熒光素受激發(fā)光的照射后會發(fā)出一定波長的熒光。
pH)漂洗5min×3/次,不時震蕩(洗去多余游離的熒光素標(biāo)記的抗體)?!ぞ彌_甘油封片–分析純無熒光的甘油9份+pH,。·鏡檢:在熒光顯微鏡下觀察。·優(yōu)點:方法簡便、特異性高,非特異性熒光染色少?!と秉c:敏感性偏低;而且每檢查一種抗原就需要制備一種熒光抗體。若檢測多種抗原需制備多種相應(yīng)的熒光標(biāo)記抗體。?直接免疫熒光法的注意事項·對熒光標(biāo)記的抗體的稀釋:要保證抗體的蛋白有一定的濃度;·一般稀釋度不應(yīng)超過1:20,抗體濃度過低,會導(dǎo)致產(chǎn)生的熒光過弱,影響結(jié)果的觀察。?直接免疫熒光法的注意事項(續(xù))·染色溫度和時間需要根據(jù)各種不同的標(biāo)本及抗原而變化;–染色時間:從10min到數(shù)小時,一般30min;–染色溫度:多采用室溫(25?C),高于37?C可加強染色效果,但對不耐熱的抗原(如流行性乙型腦炎***)可采用0-2?C的低溫,延長染色時間。–低溫染色過夜較37?C30min效果好的多。?直接免疫熒光法的注意事項(續(xù))·試驗時需設(shè)置下列對照:–自發(fā)熒光對照(空白對照):標(biāo)本加,。–陽性對照:用已知的陽性標(biāo)本加熒光標(biāo)記的特異性抗體。–特異性對照(***試驗):標(biāo)本加未標(biāo)記的特異性抗體,再加熒光標(biāo)記的特異性抗體。
我單獨做了一次實驗來排除該因素。結(jié)果孵育2、5min時先出現(xiàn)背景,而特異性染色較淺,故這不符合常理,一般先出現(xiàn)特異性染色,然后隨著時間的延長,會出現(xiàn)非特異性背景著色。3、***,血清封閉的問題?以前我一般孵育15-30min,所以我單獨做了一次實驗用血清封閉室溫1h,其它條件同做出來的那一次,結(jié)果也一樣背景著色很深。4、此外,我在改進的同時,也對PBS清洗不斷地延長時間和增加次數(shù),甚至完全參照試劑盒說明書來進行操作(我以前一般一抗4℃過夜且室溫復(fù)溫45min、二抗37℃30min、SP反應(yīng)37℃30min),以及過氧化氫滅活加強等等均未起到效果。我冷靜地分析了一下整個實驗流程,與***次做出來相比,只有兩個地方做了改動:因血清不夠而更換了不同廠家試劑盒、因抗體稀釋液用完而重新買了抗體稀釋液。5、我用PBS替代一抗稀釋液(我以前還回收抗體,自我覺得抗體稀釋液中含防腐劑和蛋白穩(wěn)定劑),其它步驟和組織切片完全與***次做出來的一致(包括血清也是老試劑盒內(nèi)剩余的一點),奇跡出現(xiàn)了:結(jié)果很好。因為抗原抗體反應(yīng)除溫度、抗原/抗體濃度外,然后就是pH值,于是我測了新抗體稀釋液、老抗體稀釋液和PBS的pH值,結(jié)果是前者偏酸性(<6、0),而后兩者均在7、5左右。天津多色熒光免疫組化
天津七色免疫組化染色服務(wù)
用甲醇配置過氧化氫比雙蒸水或PBS可能好在保護抗原和固定組織作用,過氧化氫孵育時間過長易引起脫片;現(xiàn)用現(xiàn)配,配好后4℃避光保存。不過,現(xiàn)在已有“第二代即用型免疫組化試劑盒”避免內(nèi)源性生物素的干擾,推薦使用。7)血清封閉組織切片上有剩余的位點可以與一抗非特異性結(jié)合,造成后續(xù)結(jié)果的假陽性;封閉血清一般是和二抗同一來源的,血清中動物自身的抗體,預(yù)先能和組織中有交叉反應(yīng)的位點發(fā)生結(jié)合;也可以用小牛血清、BSA、羊血清等,但不能與一抗來源一致。一般室溫10-30min。但也要防止封閉過度8)一抗和二抗?jié)舛群头跤龝r間一抗孵育條件在免疫組化反應(yīng)中**重要,包括孵育時間、溫度和抗體濃度。一抗孵育溫度有幾種:4℃、室溫、37℃,其中4℃效果比較好;孵育時間:這與溫度、抗體濃度有關(guān),一般37℃1-2h,而4℃過夜和從冰箱拿出后37℃復(fù)溫45min。具體條件還要摸索。二抗孵育條件:二抗一般室溫或37℃30min-1h,具體時間需要摸索,而濃度一般有工作液,若是濃縮液還要摸索濃度。但在免疫組化中我們一般先把二抗?jié)舛群头跤龝r間先定下,然后去摸索一抗?jié)舛群头跤龝r間。建議一抗反應(yīng)在4℃比較好,反應(yīng)溫和,但時間比較好超過16~24h。天津七色免疫組化染色服務(wù)
上海朝瑞生物科技有限公司始建于2003-01-22,坐落于上海市松江區(qū)廣富林路697號昂立大廈2113室,現(xiàn)有員工5~10人余人。zrbiorise,SPRICELL,scienceladde是上海朝瑞生物科技有限公司的主營品牌,是專業(yè)的1.發(fā)布科研技術(shù) 2.發(fā)布應(yīng)用技術(shù) 3.發(fā)布專業(yè)專長 4.發(fā)布科研成果 5.發(fā)布我的需求 6.發(fā)布篩選檢驗檢測服務(wù) 7.發(fā)布協(xié)同代研發(fā)服務(wù) 8.發(fā)布升級改造產(chǎn)品服務(wù) 9.發(fā)布實驗室及儀器設(shè)備共享 10.發(fā)布培訓(xùn)基地共享 11.發(fā)布工廠代加工及共享車間 12.發(fā)布科研/項目團隊招聘13.發(fā)布研究生婚戀 14.發(fā)布項目整包服務(wù) 15.發(fā)布資源交換業(yè)務(wù)公司,擁有自己獨立的技術(shù)體系。公司以用心服務(wù)為核心價值,希望通過我們的專業(yè)水平和不懈努力,將1.發(fā)布科研技術(shù) 2.發(fā)布應(yīng)用技術(shù) 3.發(fā)布專業(yè)專長 4.發(fā)布科研成果 5.發(fā)布我的需求 6.發(fā)布篩選檢驗檢測服務(wù) 7.發(fā)布協(xié)同代研發(fā)服務(wù) 8.發(fā)布升級改造產(chǎn)品服務(wù) 9.發(fā)布實驗室及儀器設(shè)備共享 10.發(fā)布培訓(xùn)基地共享 11.發(fā)布工廠代加工及共享車間 12.發(fā)布科研/項目團隊招聘13.發(fā)布研究生婚戀 14.發(fā)布項目整包服務(wù) 15.發(fā)布資源交換業(yè)務(wù)等業(yè)務(wù)進行到底。上海朝瑞科技始終以質(zhì)量為發(fā)展,把顧客的滿意作為公司發(fā)展的動力,致力于為顧客帶來高品質(zhì)的[ "科研技術(shù)服務(wù)", "應(yīng)用技術(shù)服務(wù)", "科研成果轉(zhuǎn)化", "科學(xué)產(chǎn)品銷售" ]。
文章來源地址: http://m.cdcfah.com/cp/875237.html
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