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通常在多肽和生物素之間使用6-氨基己酸作為紐帶,紐帶能夠靈活結(jié)合底物,并且在有空間位阻的情況下能結(jié)合地更好。9、熒光標(biāo)記熒光標(biāo)記可用于追蹤活細(xì)胞內(nèi)多肽,也可用于研究酶和作用機(jī)制。色氨酸(Trp)帶有熒光,因此可以被用于內(nèi)在標(biāo)記。色氨酸的發(fā)射光譜取決于**環(huán)境,隨著溶劑極性降低而降低,浙江新品RNA合成儀哪里有,這種性質(zhì)對(duì)于檢測(cè)多肽結(jié)構(gòu)和受體結(jié)合很有用處[12]。色氨酸熒光可以被質(zhì)子化的門冬氨酸和谷氨酸淬滅,這可能會(huì)限制其使用。丹磺酰氯基團(tuán)(Dansyl)與氨基結(jié)合時(shí)具有高度熒光,也常被用于氨基酸或蛋白質(zhì)的熒光標(biāo)記。熒光共振能量轉(zhuǎn)換(FRET)對(duì)酶的研究十分有用,應(yīng)用FRET時(shí),底物多肽常含有一個(gè)熒光標(biāo)記基團(tuán)和一個(gè)熒光淬滅基團(tuán)。標(biāo)記的熒光基團(tuán)會(huì)被淬滅劑通過(guò)非光子能量傳遞淬滅。當(dāng)多肽從所研究的酶上解離下來(lái),標(biāo)記基團(tuán)就會(huì)發(fā)射熒光。10、籠形多肽籠形多肽有光學(xué)移除性的保護(hù)基,浙江新品RNA合成儀哪里有,光學(xué)移除性保護(hù)基可以屏蔽多肽與受體的結(jié)合。當(dāng)受到UV照射時(shí),多肽會(huì)被活化,恢復(fù)與受體的親和力,浙江新品RNA合成儀哪里有。由于這種光學(xué)活化可以根據(jù)時(shí)間、振幅或者位置來(lái)控制,因而籠形多肽可以被用于研究細(xì)胞內(nèi)發(fā)生的反應(yīng)[13]。**常用于籠形多肽的保護(hù)基是2-硝基芐基及其衍生物。
使用可選擇性移除保護(hù)基團(tuán)的絲氨酸、蘇氨酸和酪氨酸殘基可以實(shí)現(xiàn)選擇性磷酸化。一些磷酰化試劑也可通過(guò)后修飾在多肽中引入磷酸基團(tuán)[5]。近年來(lái),有學(xué)者使用化學(xué)選擇性的Staudinger-亞磷酸酯反應(yīng)實(shí)現(xiàn)了賴氨酸的位點(diǎn)特異性磷酸化(圖3)4、豆蔻?;妥貦磅;弥舅狨;疦末端可以讓多肽或蛋白質(zhì)與細(xì)胞膜結(jié)合。N末端上豆蔻?;男蛄锌梢允筍rc家族的蛋白激酶和逆轉(zhuǎn)錄酶Gaq蛋白靶向結(jié)合細(xì)胞膜。利用標(biāo)準(zhǔn)的偶聯(lián)反應(yīng)即可將豆蔻酸連接到樹脂-多肽的N末端,生成的脂肽可在標(biāo)準(zhǔn)條件下解離并通過(guò)RP-HPLC純化。5、糖基化糖肽類如萬(wàn)古霉素和***拉寧是***耐藥細(xì)菌傳染的重要***,其他糖肽常被用于刺激免疫系統(tǒng)。另外,由于很多微生物抗原是糖基化的,因此研究糖肽對(duì)提高傳染的***效果具有重要意義。另一方面,有研究發(fā)現(xiàn)**細(xì)胞細(xì)胞膜上的蛋白質(zhì)表現(xiàn)出異常的糖基化,這使得糖肽在**和**免疫防御研究中也發(fā)揮著重要作用。糖肽的制備一般利用Fmoc/t-Bu方法。糖基化殘基,比如蘇氨酸和絲氨酸常通過(guò)五氟苯酚酯活化的Fmoc保護(hù)糖基化氨基酸引入到多肽中。6、異戊二烯化異戊二烯化發(fā)生在C末端附近側(cè)鏈上的半胱氨酸殘基。蛋白質(zhì)的異戊二烯化可以提高細(xì)胞膜親和性,形成蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用。
然而個(gè)別基因的合成占到大部分,參考價(jià)值很有限。因此使用“基因合成試劑盒”對(duì)于需要作本地基因合成的實(shí)驗(yàn)者而言可能給是一個(gè)相當(dāng)不錯(cuò)的決定。基因合成的優(yōu)點(diǎn)1、自然界中很難獲得甚至不存在的基因能夠按照研究人員自己的意愿設(shè)計(jì)得到。2、通過(guò)密碼子優(yōu)化基因合成的基因,能夠在各種生物表達(dá)體系中使基因都能得到良好表達(dá)。3、只有很短的合成周期,能夠使序列的***正確得到保證。4、能夠修改基因序列和基因的酶切位點(diǎn),為下游的克隆和實(shí)驗(yàn)提供了便利,具有的靈活性更加的大?;蚝铣傻膽?yīng)用1、對(duì)合成DNA疫苗進(jìn)行設(shè)計(jì)。2、對(duì)用于微芯片的cDNA進(jìn)行大量的合成。3、對(duì)重組抗體或人鼠抗體進(jìn)行顆粒。4、對(duì)不同的基因突變株、SNPS、或其它突變株進(jìn)行合成。
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