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產(chǎn)品關(guān)鍵詞:江蘇病原微生物熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù),熒光定量PCR
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詳細(xì)說(shuō)明
一個(gè)評(píng)估 PCR 效率的關(guān)鍵參數(shù)是 R2,它是說(shuō)明如何使用一個(gè)數(shù)值預(yù)測(cè)另一個(gè)數(shù)值的相關(guān)程度的統(tǒng)計(jì)學(xué)術(shù)語(yǔ)。如果 R2 為 1,那么 Y 值 (Ct) 可以用來(lái)準(zhǔn)確預(yù)測(cè) X 值(圖7A)。如果 R2 為 0,那么就不能通過(guò) Y 值預(yù)測(cè) X 值(圖 7B)。R2 值 >0.99 表示兩個(gè)數(shù)值之間相關(guān)的置信度良好。
精確度
標(biāo)準(zhǔn)差(偏差的平方根)是**常用的精確度計(jì)量方法。如果許多數(shù)據(jù)點(diǎn)都靠**均值,則標(biāo)準(zhǔn)差就??;如果許多數(shù)據(jù)點(diǎn)都遠(yuǎn)離平均值,則標(biāo)準(zhǔn)差就大。
實(shí)際上,足夠多重復(fù)次數(shù)產(chǎn)生的數(shù)據(jù)**形成大致的正態(tài)分布。這經(jīng)??赏ㄟ^(guò)經(jīng)典的中心極限定理來(lái)證明,該定理稱大量**同分布隨機(jī)變量的和在無(wú)限多時(shí)趨向于正態(tài)分布。如圖 8A 所示,江蘇病原微生物熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù),江蘇病原微生物熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù),江蘇病原微生物熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù),約 68% 的值在平均值的 1 個(gè)標(biāo)準(zhǔn)差之內(nèi),約 95% 的值在平均值的 2 個(gè)標(biāo)準(zhǔn)差之內(nèi),約 99.7% 的值在平均值的 3 個(gè)標(biāo)準(zhǔn)差之內(nèi)。 江蘇病原微生物熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)
熒光染料可與雙鏈DNA結(jié)合,每個(gè)循環(huán)的延伸階段,染料摻入雙鏈DNA中,其熒光信號(hào)強(qiáng)度與PCR產(chǎn)物的數(shù)量呈正相關(guān)。同時(shí),其缺點(diǎn)也在于其非特異性。當(dāng)PCR反應(yīng)中有引物二聚體或者非特異性擴(kuò)增時(shí),該染料也可以和這些非特異性擴(kuò)增產(chǎn)物結(jié)合,發(fā)出熒光,從而干擾對(duì)特異性產(chǎn)物的準(zhǔn)確定量。
常用的染料為SYBR Green I,各公司針對(duì)熒光信號(hào)強(qiáng)度、***作用等進(jìn)行改進(jìn),也推出了很多新的染料供大家選擇。
Promega采用新型熒光染料BRYT Green® Dye,對(duì)qPCR反應(yīng)沒有***作用,與雙鏈DNA結(jié)合后熒光信號(hào)更強(qiáng). 江蘇基因突變熒光定量PCR分析服務(wù)
實(shí)時(shí)熒光定量 PCR,又稱為定量 PCR 或 qPCR,可以為測(cè)定樣品中的靶標(biāo)序列或基因數(shù)量提供簡(jiǎn)單、簡(jiǎn)潔的方法。該方法高度簡(jiǎn)化,有時(shí)會(huì)忽略實(shí)現(xiàn)方法方面的關(guān)鍵因素,因此導(dǎo)致出現(xiàn)問(wèn)題。本文將重點(diǎn)強(qiáng)調(diào)設(shè)置和評(píng)估實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 反應(yīng)時(shí)必須考慮的這些因素。
實(shí)時(shí)熒光定量PCR在病原微生物檢測(cè)中的應(yīng)用
實(shí)時(shí)熒光定量PCR是通過(guò)熒光信號(hào)監(jiān)測(cè)目的基因擴(kuò)增數(shù)量的定量PCR技術(shù),具有靈敏度高,檢測(cè)速度快等優(yōu)點(diǎn)。實(shí)時(shí)熒光定量PCR已被應(yīng)用于乙肝病原微生物、登革熱病原微生物、流感病原微生物、水皰口炎病原微生物等病原微生物的快速檢測(cè),在病原微生物快速分型、相似病原微生物的鑒別檢測(cè)、耐藥病原微生物突變體檢測(cè)等臨床和公共衛(wèi)生領(lǐng)域得到***應(yīng)用??袢∈俏:?yán)重的**共患病,病死率幾乎為。實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)已被應(yīng)用于狂犬病病原微生物和狂犬病相關(guān)病原微生物的核酸檢測(cè),具有與金標(biāo)準(zhǔn)DFA相當(dāng)?shù)撵`敏度和特異度,同時(shí)克服了金標(biāo)準(zhǔn)DFA的某些局限性,如檢測(cè)速度更快,無(wú)需提取腦組織,對(duì)唾液、腦脊液等低病原微生物載量樣本具有較好的檢出效果,具有成為人間狂犬病診斷技術(shù)的潛力。靈敏度是傳統(tǒng)RT-PCR的200倍以上,交叉污染的風(fēng)險(xiǎn)更低。實(shí)時(shí)熒光定量PCR也應(yīng)用于歐洲蝙蝠病原微生物等狂犬病相關(guān)病原微生物的檢測(cè),可建立多重實(shí)時(shí)熒光定量PCR在單一檢測(cè)體系對(duì)多種病原微生物進(jìn)行快速鑒別,對(duì)于預(yù)防病原微生物性傳染病具有重要的公共衛(wèi)生意義。
轉(zhuǎn)基因:利用熒光定量PCR技術(shù)將轉(zhuǎn)基因信號(hào)擴(kuò)增放大。
在環(huán)境監(jiān)測(cè)方面的應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)已經(jīng)被國(guó)內(nèi)外應(yīng)用在環(huán)境監(jiān)測(cè)中,提高了監(jiān)測(cè)水平。此項(xiàng)技術(shù)可以檢測(cè)河流中環(huán)境微生物隨著季節(jié)變化的情況。還可以用來(lái)對(duì)地表水和飲用水中致病菌進(jìn)行檢測(cè)以便及時(shí)預(yù)告地表水污染情況以及采取相應(yīng)有效措施避免大范圍污染
儀器擺放:實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 儀應(yīng)安放在濕度較低、灰塵較少、遠(yuǎn)離水池的平穩(wěn)臺(tái)面上,不能有強(qiáng)光直射,室內(nèi)應(yīng)通風(fēng)良好,無(wú)腐蝕性氣體 江蘇基因突變熒光定量PCR分析服務(wù)
江蘇病原微生物熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)
在使用具有相同 ROX 水平的兩種預(yù)混液的一次檢測(cè)中獲得的原始熒光數(shù)據(jù)。信號(hào)差異是由預(yù)混液的成分造成的。使用 Applied Biosystems? VIC?/MGB 探針在 Applied Biosystems? 7900HT 快速實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 系統(tǒng)上執(zhí)行此反應(yīng)。x 軸顯示熒光基團(tuán)的的發(fā)射波長(zhǎng),y 軸顯示發(fā)射強(qiáng)度。
任何分子的熒光發(fā)射都受環(huán)境因素的影響,比如溶液的 pH 值和鹽濃度。圖 2 顯示某個(gè) Applied Biosystems? TaqMan® 探針在兩種不同預(yù)混液背景下的原始熒光數(shù)據(jù)。請(qǐng)注意,盡管兩組反應(yīng)的靶標(biāo)、探針和 ROX 染料濃度都相同,預(yù)混液 A 中的熒光強(qiáng)度更高 江蘇病原微生物熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)
上海朝瑞生物科技有限公司坐落上海市松江區(qū)廣富林路697號(hào)昂立大廈2113室,交通便利,環(huán)境優(yōu)美,是一家服務(wù)型企業(yè)。是一家有限責(zé)任公司企業(yè),隨著市場(chǎng)的發(fā)展和生產(chǎn)的需求,與多家企業(yè)合作研究,在原有產(chǎn)品的基礎(chǔ)上經(jīng)過(guò)不斷改進(jìn),追求新型,在強(qiáng)化內(nèi)部管理,完善結(jié)構(gòu)調(diào)整的同時(shí),優(yōu)良的質(zhì)量、合理的價(jià)格、完善的服務(wù),在業(yè)界受到***好評(píng)。公司目前擁有***員工5~10人人,具有[ "科研技術(shù)服務(wù)", "應(yīng)用技術(shù)服務(wù)", "科研成果轉(zhuǎn)化", "科學(xué)產(chǎn)品銷售" ]等多項(xiàng)業(yè)務(wù)。上海朝瑞科技順應(yīng)時(shí)代發(fā)展和市場(chǎng)需求,通過(guò)**技術(shù),力圖保證高規(guī)格高質(zhì)量的[ "科研技術(shù)服務(wù)", "應(yīng)用技術(shù)服務(wù)", "科研成果轉(zhuǎn)化", "科學(xué)產(chǎn)品銷售" ]。
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