免疫印跡法（immunoblotting ）因與Southern早先建立的檢測核酸的印跡方法Southern

blot相類似，上海線粒體蛋白Western Blot檢測服務，上海線粒體蛋白Western Blot檢測服務，亦被稱為Western blot。免疫印跡（western blotting）是在蛋白質電泳分離和抗原抗體檢測的基礎上發(fā)展起來一項檢測蛋白質的技術。它將SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳的辨力與抗原抗體反應的特異性相結合。典型的印跡實驗包括三個步驟①蛋白質的電泳分離；②將電泳后凝膠上的蛋白質轉移至固體膜上，用非特異性，非反應活性分子封閉固體膜上未吸附蛋白質區(qū)域；③免疫學檢測，上海線粒體蛋白Western Blot檢測服務。免疫印跡克服了聚丙烯酰胺凝膠電泳后直接在凝膠上進行免疫學分析的弊端，極大地提高了其利用率、分辨率和靈敏度，使其成為使用**的免疫化學方法之一。 上海線粒體蛋白Western Blot檢測服務

全自動單細胞western blot檢測分析原理：全自動單細胞western blot分析是單細胞水平，蛋白質表達定量分析系統(tǒng)。系統(tǒng)采用**的微流控western blot芯片，通過單細胞微孔設計，采集單細胞，然后原位裂解細胞，釋放蛋白，進行蛋白質電泳，將不同分子量蛋白進行分離，提高免疫學檢測特異性。之后，采用**技術進行蛋白質原位捕獲，使用western blot驗證抗體及熒光標記二抗直接雜交，掃描儀進行芯片掃描后，分析軟件對掃描結果進行深度定量分析。北京膜蛋白Western Blot技術服務

(1) SDS-PAGE凝膠配制 

SDS-PAGE凝膠可以使用商業(yè)生產的SDS-PAGE凝膠配制試劑盒。

(2) 樣品處理：在收集的蛋白樣品中加入適量濃縮的SDS-PAGE蛋白上樣緩沖液。例如2X或5X的SDS-PAGE蛋白上樣緩沖液。使用5X的SDS-PAGE蛋白上樣緩沖液可以減小上樣體積，在相同體積的上樣孔內可以上樣更多的蛋白樣品。5X的SDS-PAGE蛋白上樣緩沖液可以參考相關文獻資料配制100℃或沸水浴加熱3-5分鐘，以充分變性蛋白。 

(3) 上樣與電泳：冷卻到室溫后，把蛋白樣品直接上樣到SDS-PAGE膠加樣孔內即可。 為了便于觀察電泳效果和轉膜效果，以及判斷蛋白分子量大小，比較好使用預染蛋白質分子量標準(P0066)。電泳時通常推薦在上層膠時使用低電壓恒壓電泳，而在溴酚藍進入下層膠時使用高電壓恒壓電泳。對于Bio-Rad的標準電泳裝置或類似電泳裝置，低電壓可以設置在80-100V，高電壓可以設置在120V左右。SDS-PAGE可以采用普通的電泳儀就可以滿足要求。通常電泳時溴酚藍到達膠的底端處附近即可停止電泳，或者可以根據(jù)預染蛋白質分子量標準的電泳情況，預計目的蛋白已經(jīng)被適當分離后即可停止電泳。

Western blotting堪稱蛋白質研究中的經(jīng)典方法。學生物的幾乎無人不曉，即使沒親手做過，也清楚其原理。經(jīng)典果然是經(jīng)典，30年來其操作步驟幾乎沒變過，依然是跑膠-轉膜-封閉-孵育-檢測。近兩年，各大公司陸續(xù)推出了Western blotting方面的新儀器，如新型轉印系統(tǒng)，確實能省時省力不少，但仍然不能完全克服研究人員在面臨的挑戰(zhàn)。Western

blotting仍存在重復性差、實驗耗時長、無法準確定量等問題。

近日，美國proteinsimple公司推出了一種Simple Western?分析，徹底改變了整個Western blot。此分析在一臺名為Simon的儀器上開展，Simon將所有實驗步驟自動化，包括蛋白上樣和分離、免疫印跡、洗滌、檢測以及數(shù)據(jù)的定量分析，讓研究人員從繁重的勞動中解放出來，同時避免了可能影響實驗重復性的人為因素。

全自動western  blot無需凝膠、無需轉印，放入您的樣品，按個按鈕，然后就沒事了。首先，將樣品與Simple

Western樣品緩沖液混合，至終濃度1 μg/μL，還原并變性，然后將制備好的樣品、一抗和二抗、化學發(fā)光底物分配到384孔分析板的指定孔中。之后，將Simple

Western分析緩沖液、毛細管和制備好的分析板放入Simon內，它自動開展所有分析步驟。當?shù)鞍籽刂毠軆纫粋€堆積和分離基質遷移時，它們分離。分離后的蛋白固定到毛細管壁上。之后利用一抗鑒定目標蛋白，用HRP結合的二抗和化學發(fā)光底物檢測蛋白。系統(tǒng)自動報告檢測蛋白的分子量和信號。每次實驗可同時分析**多12個樣品，結果可在3-5小時內獲得。15-150 kDa的目標蛋白均可檢測。軟件報告每個檢測蛋白的分子量、面積、面積百分比和信噪比。對于傳統(tǒng)的Western blot而言，結果的重復性一直是個挑戰(zhàn)，因為缺乏標準化的操作，且多個操作步驟引入了實驗可變性。而Simple Western分析是完全自動化的，因此結果的重復性更好。整體的定量也**改善了，因為省去了轉印步驟，從而避免了蛋白轉移的不一致。 上海**白Western Blot技術服務

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收集蛋白樣品(Protein sample preparation)

可以使用適當?shù)牧呀庖?，Western及IP細胞裂解液、RIPA裂解液等，裂解貼壁細胞、懸浮細胞或組織樣品。對于某些特定的亞細胞組份蛋白，例如細胞**白、細胞漿蛋白、線粒體蛋白等，可以參考相關文獻提取這些亞細胞組份蛋白，也可以使用試劑盒進行抽提。收集完蛋白樣品后，為確保每個蛋白樣品的上樣量一致，需要測定每個蛋白樣品的蛋白濃度。根據(jù)所使用的裂解液的不同，需要采用適當?shù)牡鞍诐舛葴y定方法。因為不同的蛋白濃度測定方法對于一些去垢劑和還原劑等的兼容性差別很大。如果使用Western及IP細胞裂解液或RIPA裂解液，可以使用BCA蛋白濃度測定試劑盒 上海線粒體蛋白Western Blot檢測服務

上海朝瑞生物科技有限公司創(chuàng)立于2003-01-22，是一家服務型公司。上海朝瑞科技致力于為客戶提供質量的[ "科研技術服務", "應用技術服務", "科研成果轉化", "科學產品銷售" ]，一切以用戶需求為中心,深受廣大客戶的歡迎。公司秉持誠信為本的經(jīng)營理念，在化工深耕多年，以技術為先導，以自主產品為**，發(fā)揮人才優(yōu)勢，打造化工質量品牌。公司憑借深厚技術支持，年營業(yè)額度達到2000-3000萬元，并與多家行業(yè)**公司建立了緊密的合作關系。

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