免疫印跡反應(yīng)SDS-PAGE結(jié)束后，江蘇重組人源Claudin18.2蛋白***的選擇，按Bio-Rad產(chǎn)品說明，凝膠靠近陰極一側(cè)，硝酸纖維膜(NC膜)靠近陽極一側(cè)，置轉(zhuǎn)移緩沖液中(25mmol/LTris、192mmol/LGlycine、20%甲醇)，100V恒壓lh，將蛋白從凝膠電轉(zhuǎn)移至NC膜上，電轉(zhuǎn)移結(jié)束后，取出NC膜，用洗滌液TBST(含mol/LTBS、Tween20)室溫洗3次，浸入封閉液(含2°/。BSA的TBST)中37°C，1h，洗滌液(TBST)室溫洗3次，加山羊抗人，37。C孵育1h，TBST室溫洗膜3次，加入兔抗山羊IgG-HRP二抗，37'C孵育lh，江蘇重組人源Claudin18.2蛋白***的選擇，TBST室溫洗膜3次，再用TBS洗3次，NC膜浸入OPD顯色液中，室溫避光顯色10min，蒸餾水沖洗終止反應(yīng)。(3)融合蛋白的純化和復(fù)性取含，5000rpm離心10min,收菌，超聲裂菌；4'C，12000rpm，離心20min,分別收集上清液和沉淀。將沉淀用6mol/L尿素溶液重懸，fC下靜置溶解。將溶解的沉淀和上清分別取樣進行SDS-PAGE電泳，對目的蛋白的表達形式進行分析。在證實目的蛋白以包涵體的形式表達后，用Ni-NTA柱親和層析純化所溶解的沉淀(包涵體)，江蘇重組人源Claudin18.2蛋白***的選擇。按1g菌體加10mL裂菌緩沖液的比例將菌體重懸，冰浴條件下進行超聲裂菌。12000rpm，離心15min，棄上清，1g沉淀加10mL6M尿素，，MTris(pH)。4'C攪拌2h，12000rpm，離心15min，共離心2次，收集上清待用。用6M尿素。江蘇重組人源Claudin18.2蛋白***的選擇

    再用含250mmol咪唑的6M尿素，,(pH8,0)洗脫目的蛋白。收集洗脫峰，純化產(chǎn)物透析至2M尿素，，Tris(pH)復(fù)性，終濃度lmg/ml。***透析入(pH)中，PEG8000濃縮后，用Bradford法測定蛋白濃度(參見圖2)。三、動物模型實驗(1)小鼠分組與免疫方案分組將24只BALB/c小鼠分成4組，于小鼠背部皮下按照口107個/只，每組6只分別接種胃*MFC和胰腺*MPC-83細胞各2組。每個腫瘤細胞接種2組荷瘤小鼠，待成瘤后，按照常規(guī)免疫方法分別注射鹽水。在第4次免疫后10天摘眼球**，測定血清中抗。免疫方案背部皮下多點注射；rhClaudinl8,2:40Wg/只+生理鹽水總體積為200txL/只，分別隔周注射；第4次，使用:40ug/只+生理鹽水200wL/只，腹腔注射。(2)￡03八法測定血清抗(:1&11&在第4次免疫后10天**，收集抗血清，通過間接ELISA測定血清抗。每個樣品均設(shè)6個孔。ELISA實驗方法如下所需溶液的配制a.包被緩沖液碳酸鹽緩沖液取Na2C03:g(終濃度mol/L)，NaHC03:(終濃度mol/L)，純水定容至200mL()，有效期兩周。b.洗滌液含Tween-20的PBS()。c.封閉液含1%BSA的洗滌液。d.稀釋液含BSA的洗滌液。e.底物緩沖液Na2HP04*12H20:g，檸檬酸mL(pH)。f.底物顯色液OPD:8mg，3%H202:30uL。h.終止液H2S04:lmol/L。北京人源Claudin18.2蛋白****

上海朝瑞生物科技有限公司是一家成立于2003年的****，總部坐落于上海。 公司自成立以來，秉承“真誠服務(wù)、合作雙贏”的經(jīng)營理念和良好的運作模式， 現(xiàn)已發(fā)展成為產(chǎn)品種類豐富、技術(shù)力量雄厚、配套設(shè)施齊全的前列生物技術(shù)企業(yè)。 我公司擁有良好的進貨渠道及國外采購合作伙伴， 能夠為您提供全球數(shù)百家公司的數(shù)百萬種產(chǎn)品的現(xiàn)貨及期貨訂購服務(wù)（見列表）。 同時，我公司竭誠為您提供以下生物工程技術(shù)服務(wù)： （1）美國Affymetrix系列基因芯片服務(wù)； （2）Illumina SNP平臺服務(wù)基因分型； （3）microRNA技術(shù)服務(wù)； （4）基因SNP課題研究服務(wù)； （5）生物信息學(xué)服務(wù)； （6）適時熒光定量（Realtime）PCR檢測服務(wù)； （7）RNA干擾服務(wù)； （8）全基因人工合成； （9）DNA合成服務(wù)； （10）多肽合

    其中該抗體或其抗原結(jié)合部分與。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的分離的抗體或其抗原結(jié)合部分，其中所述重鏈可變區(qū)包含SEQIDNOs:17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、或49的序列。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的分離的抗體或其抗原結(jié)合部分，包含輕鏈可變區(qū)，該輕鏈可變區(qū)包含CDR1區(qū)、CDR2區(qū)和CDR3區(qū)，其中該CDR1區(qū)、CDR2區(qū)和CDR3區(qū)分別包含(1)SEQIDNOs:10、13和16；(2)SEQIDNOs:11、13和16；(3)SEQIDNOs:10、14和16；(4)SEQIDNOs:12、13和16；或(5)SEQIDNOs:10、15和16的序列。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的分離的抗體或其抗原結(jié)合部分，其中，包含輕鏈可變區(qū)，該輕鏈可變區(qū)包含SEQIDNOs:50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65或66的序列。5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的分離的抗體或其抗原結(jié)合部分，包含輕鏈可變區(qū)，其中所述重鏈可變區(qū)和所述輕鏈可變區(qū)分別包含(1)SEQIDNOs:17和50；(2)SEQIDNOs:18和51；(3)SEQIDNOs:19和52；(4)SEQIDNOs:20和53；(5)SEQIDNOs:21和54；(6)SEQIDNOs:22和55；(7)SEQIDNOs:23和55；(8)SEQIDNOs:24和55；(9)SEQIDNOs:25和55；(10)SEQIDNOs:26和55；。

實驗內(nèi)容包括：a.單次給藥毒性試驗（嚙齒類） b.多次給藥毒性試驗（嚙齒類，28天、90天、180天等） c. 局部毒性試驗 1）血管刺激性試驗 2）眼刺激性試驗 3）肌肉刺激性/植入試驗 4）黏膜刺激性試驗（鼻腔、口腔、直腸、陰道黏膜等） 5）皮膚光毒試驗 6）皮膚刺激性試驗（急性、多次） 7）皮內(nèi)刺激性試驗 d. 免疫原性試驗 1）主動全身過敏性試驗 2）被動皮膚過敏性試驗 3）Buehler 試驗 4）溶血性試驗 5）皮膚***反應(yīng)試驗 e. 安全性藥理試驗 1）自發(fā)活動試驗 2）爬桿試驗 3）轉(zhuǎn)棒試驗 f. 遺傳毒性試驗 1）鼠傷寒沙門氏菌回復(fù)突變試驗（Ame’s） 2）體內(nèi)骨髓微核試驗 3）微核組學(xué)試驗（CBMN） 4）體外哺乳動物細胞染色體畸變試驗 5）骨髓細胞染色體畸變試驗 6）精原細胞染色體畸變試驗 7）精子畸形試驗 8）體外哺乳動物細胞基因突變試驗（ＴＫ） g.毒代動力學(xué)試驗 h. 致畸試驗.北京人源Claudin18.2蛋白****

江蘇重組人源Claudin18.2蛋白***的選擇

    3%H202:30uL。h.終止液H2S04:lmol/L。操作方法包被先取96孔ELISA板，將(ug/ml)，按100uL/孔加入板孔中，4。C包被過夜；倒掉包被液，加入封閉液，室溫下封存2h;棄去封閉液，用洗滌液洗6次，每次2min;分別加入倍比稀釋的山羊抗人(500ug/ml)和抗血清，100wL/孔，室溫下孵育lh;棄去抗體和抗血清，用洗滌液洗6次，每次3min;加入HRP標(biāo)記的抗山羊二抗，100nL/孔，室溫孕育lh;棄去二抗，用洗滌液洗6次，每次3min;加入底物顯色液，100uL/孔，室溫，顯色10-20min;加入終止液，50"L/孔，終止反應(yīng)；酶標(biāo)儀讀數(shù)，測定沒孔在4卯nm的吸光值。免疫印跡反應(yīng)測定血清抗，結(jié)束后，按Bio-Rad產(chǎn)品說明，凝膠靠近陰極一側(cè)，硝酸纖維膜(NC膜)靠近陽極一側(cè)，置轉(zhuǎn)移緩沖液中(25mmol/LTris、192mmol/LGlycine、20%甲醇)，100V恒壓lh，將蛋白從凝膠電轉(zhuǎn)移至NC膜上，電轉(zhuǎn)移結(jié)束后，取出NC膜，用洗滌液TBST(含mol/TBS、Tween20)室溫洗3次，浸入封閉液(含2%BSA的TBST)中37。C，1h，洗滌液(TBST)室溫洗3次，加荷瘤小鼠抗血清，37t孵育1h，TBST室溫洗膜3次，加入兔抗山羊IgG-HRP二抗(中杉公司)，37'C孵育1h，TBST室溫洗膜3次，再用TBS洗3次，NC膜浸入OPD顯色液中，室溫避光顯色10min，蒸餾水沖洗終止反應(yīng)。江蘇重組人源Claudin18.2蛋白***的選擇

上海朝瑞生物科技有限公司是一家1.發(fā)布科研技術(shù) 2.發(fā)布應(yīng)用技術(shù) 3.發(fā)布專業(yè)專長 4.發(fā)布科研成果 5.發(fā)布我的需求 6.發(fā)布篩選檢驗檢測服務(wù) 7.發(fā)布協(xié)同代研發(fā)服務(wù) 8.發(fā)布升級改造產(chǎn)品服務(wù) 9.發(fā)布實驗室及儀器設(shè)備共享 10.發(fā)布培訓(xùn)基地共享 11.發(fā)布工廠代加工及共享車間 12.發(fā)布科研/項目團隊招聘13.發(fā)布研究生婚戀 14.發(fā)布項目整包服務(wù) 15.發(fā)布資源交換業(yè)務(wù)的公司，致力于成為客戶業(yè)務(wù)創(chuàng)新、化工可信賴的合作伙伴。上海朝瑞科技作為1.發(fā)布科研技術(shù) 2.發(fā)布應(yīng)用技術(shù) 3.發(fā)布專業(yè)專長 4.發(fā)布科研成果 5.發(fā)布我的需求 6.發(fā)布篩選檢驗檢測服務(wù) 7.發(fā)布協(xié)同代研發(fā)服務(wù) 8.發(fā)布升級改造產(chǎn)品服務(wù) 9.發(fā)布實驗室及儀器設(shè)備共享 10.發(fā)布培訓(xùn)基地共享 11.發(fā)布工廠代加工及共享車間 12.發(fā)布科研/項目團隊招聘13.發(fā)布研究生婚戀 14.發(fā)布項目整包服務(wù) 15.發(fā)布資源交換業(yè)務(wù)的品牌企業(yè)，為客戶提供質(zhì)量的[ "科研技術(shù)服務(wù)", "應(yīng)用技術(shù)服務(wù)", "科研成果轉(zhuǎn)化", "科學(xué)產(chǎn)品銷售" ]。公司擁有多年的行業(yè)經(jīng)驗，每年以銷售收入達到2000-3000萬元，如果您想了解更多產(chǎn)品信息，請通過頁面上的電話聯(lián)系我們。上海朝瑞科技創(chuàng)始人仲緒軍，始終關(guān)注客戶，以優(yōu)化創(chuàng)新的科技，竭誠為客戶提供比較好的服務(wù)。

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