全自動(dòng)western  blot無(wú)需凝膠、無(wú)需轉(zhuǎn)印，放入您的樣品，上海**白Western Blot免疫印跡服務(wù)，按個(gè)按鈕，然后就沒(méi)事了。首先，將樣品與Simple

Western樣品緩沖液混合，至終濃度1 μg/μL，還原并變性，然后將制備好的樣品、一抗和二抗、化學(xué)發(fā)光底物分配到384孔分析板的指定孔中。之后，將Simple

Western分析緩沖液、毛細(xì)管和制備好的分析板放入Simon內(nèi)，它自動(dòng)開(kāi)展所有分析步驟。當(dāng)?shù)鞍籽刂?xì)管內(nèi)一個(gè)堆積和分離基質(zhì)遷移時(shí)，它們分離。分離后的蛋白固定到毛細(xì)管壁上。之后利用一抗鑒定目標(biāo)蛋白，用HRP結(jié)合的二抗和化學(xué)發(fā)光底物檢測(cè)蛋白。系統(tǒng)自動(dòng)報(bào)告檢測(cè)蛋白的分子量和信號(hào)。每次實(shí)驗(yàn)可同時(shí)分析**多12個(gè)樣品，結(jié)果可在3-5小時(shí)內(nèi)獲得。15-150 kDa的目標(biāo)蛋白均可檢測(cè)。軟件報(bào)告每個(gè)檢測(cè)蛋白的分子量，上海**白Western Blot免疫印跡服務(wù)、面積、面積百分比和信噪比。對(duì)于傳統(tǒng)的Western blot而言，結(jié)果的重復(fù)性一直是個(gè)挑戰(zhàn)，因?yàn)槿狈?biāo)準(zhǔn)化的操作，且多個(gè)操作步驟引入了實(shí)驗(yàn)可變性。而Simple Western分析是完全自動(dòng)化的，因此結(jié)果的重復(fù)性更好，上海**白Western Blot免疫印跡服務(wù)。整體的定量也**改善了，因?yàn)槭∪チ宿D(zhuǎn)印步驟，從而避免了蛋白轉(zhuǎn)移的不一致。 上海**白Western Blot免疫印跡服務(wù)

免疫印跡法（immunoblotting ）因與Southern早先建立的檢測(cè)核酸的印跡方法Southern

blot相類(lèi)似，亦被稱(chēng)為Western blot。免疫印跡（western blotting）是在蛋白質(zhì)電泳分離和抗原抗體檢測(cè)的基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)一項(xiàng)檢測(cè)蛋白質(zhì)的技術(shù)。它將SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳的辨力與抗原抗體反應(yīng)的特異性相結(jié)合。典型的印跡實(shí)驗(yàn)包括三個(gè)步驟①蛋白質(zhì)的電泳分離；②將電泳后凝膠上的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移至固體膜上，用非特異性，非反應(yīng)活性分子封閉固體膜上未吸附蛋白質(zhì)區(qū)域；③免疫學(xué)檢測(cè)。免疫印跡克服了聚丙烯酰胺凝膠電泳后直接在凝膠上進(jìn)行免疫學(xué)分析的弊端，極大地提高了其利用率、分辨率和靈敏度，使其成為使用**的免疫化學(xué)方法之一。 江蘇熒光Western Blot實(shí)驗(yàn)外包

(1) SDS-PAGE凝膠配制 

SDS-PAGE凝膠可以使用商業(yè)生產(chǎn)的SDS-PAGE凝膠配制試劑盒。

(2) 樣品處理：在收集的蛋白樣品中加入適量濃縮的SDS-PAGE蛋白上樣緩沖液。例如2X或5X的SDS-PAGE蛋白上樣緩沖液。使用5X的SDS-PAGE蛋白上樣緩沖液可以減小上樣體積，在相同體積的上樣孔內(nèi)可以上樣更多的蛋白樣品。5X的SDS-PAGE蛋白上樣緩沖液可以參考相關(guān)文獻(xiàn)資料配制100℃或沸水浴加熱3-5分鐘，以充分變性蛋白。 

(3) 上樣與電泳：冷卻到室溫后，把蛋白樣品直接上樣到SDS-PAGE膠加樣孔內(nèi)即可。 為了便于觀(guān)察電泳效果和轉(zhuǎn)膜效果，以及判斷蛋白分子量大小，比較好使用預(yù)染蛋白質(zhì)分子量標(biāo)準(zhǔn)(P0066)。電泳時(shí)通常推薦在上層膠時(shí)使用低電壓恒壓電泳，而在溴酚藍(lán)進(jìn)入下層膠時(shí)使用高電壓恒壓電泳。對(duì)于Bio-Rad的標(biāo)準(zhǔn)電泳裝置或類(lèi)似電泳裝置，低電壓可以設(shè)置在80-100V，高電壓可以設(shè)置在120V左右。SDS-PAGE可以采用普通的電泳儀就可以滿(mǎn)足要求。通常電泳時(shí)溴酚藍(lán)到達(dá)膠的底端處附近即可停止電泳，或者可以根據(jù)預(yù)染蛋白質(zhì)分子量標(biāo)準(zhǔn)的電泳情況，預(yù)計(jì)目的蛋白已經(jīng)被適當(dāng)分離后即可停止電泳。

轉(zhuǎn)膜(Transfer)

推薦在Western實(shí)驗(yàn)中選用PVDF膜。硝酸纖維素膜(NC膜)也可以使用，但硝酸纖維素膜比較脆，在操作過(guò)程中特別是用鑷子夾取等過(guò)程中容易裂開(kāi)。膜的使用請(qǐng)參考生產(chǎn)商的推薦使用步驟。

通常如果使用Bio-Rad的標(biāo)準(zhǔn)濕式轉(zhuǎn)膜裝置，可以設(shè)定轉(zhuǎn)膜電流為300-400mA，轉(zhuǎn)膜時(shí)間為30-60分鐘。也可以在15-20mA轉(zhuǎn)膜過(guò)夜。具體的轉(zhuǎn)膜時(shí)間要根據(jù)目的蛋白的大小而定，目的蛋白的分子量越大，需要的轉(zhuǎn)膜時(shí)間越長(zhǎng)，目的蛋白的分子量越小，需要的轉(zhuǎn)膜時(shí)間越短。在轉(zhuǎn)膜過(guò)程中，特別是高電流快速轉(zhuǎn)膜時(shí)，通常會(huì)有非常嚴(yán)重的發(fā)熱現(xiàn)象，比較好把轉(zhuǎn)膜槽放置在冰浴中進(jìn)行轉(zhuǎn)膜。

轉(zhuǎn)膜的效果可以觀(guān)察所使用的預(yù)染蛋白質(zhì)分子量標(biāo)準(zhǔn)，通常分子量比較大的1-2條帶較難全部轉(zhuǎn)到膜上。轉(zhuǎn)膜的效果也可以用麗春紅染色液(P0022)對(duì)膜進(jìn)行染色，以觀(guān)察實(shí)際的轉(zhuǎn)膜效果。也可以用考馬斯亮藍(lán)快速染色液(P0017)對(duì)完成轉(zhuǎn)膜的SDS-PAGE膠進(jìn)行染色，以觀(guān)察蛋白的殘留情況。

Western blotting堪稱(chēng)蛋白質(zhì)研究中的經(jīng)典方法。學(xué)生物的幾乎無(wú)人不曉，即使沒(méi)親手做過(guò)，也清楚其原理。經(jīng)典果然是經(jīng)典，30年來(lái)其操作步驟幾乎沒(méi)變過(guò)，依然是跑膠-轉(zhuǎn)膜-封閉-孵育-檢測(cè)。近兩年，各大公司陸續(xù)推出了Western blotting方面的新儀器，如新型轉(zhuǎn)印系統(tǒng)，確實(shí)能省時(shí)省力不少，但仍然不能完全克服研究人員在面臨的挑戰(zhàn)。Western

blotting仍存在重復(fù)性差、實(shí)驗(yàn)耗時(shí)長(zhǎng)、無(wú)法準(zhǔn)確定量等問(wèn)題。

近日，美國(guó)proteinsimple公司推出了一種Simple Western?分析，徹底改變了整個(gè)Western blot。此分析在一臺(tái)名為Simon的儀器上開(kāi)展，Simon將所有實(shí)驗(yàn)步驟自動(dòng)化，包括蛋白上樣和分離、免疫印跡、洗滌、檢測(cè)以及數(shù)據(jù)的定量分析，讓研究人員從繁重的勞動(dòng)中解放出來(lái)，同時(shí)避免了可能影響實(shí)驗(yàn)重復(fù)性的人為因素。 天津長(zhǎng)條帶Western Blot檢測(cè)服務(wù)

上海**白Western Blot免疫印跡服務(wù)

    1.為SDS—聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS-PAGE）?？乖鹊鞍讟悠方?jīng)SDS處理后帶陰電荷，在聚丙烯酰膪凝膠中從陰極向陽(yáng)極泳動(dòng)，分子量越小，泳動(dòng)速度就越快。此階段分離效果肉眼不可見(jiàn)（只有在染色后才顯出電泳區(qū)帶）。2.電轉(zhuǎn)移。將在凝膠中已經(jīng)分離的條帶轉(zhuǎn)移至硝酸纖維素膜上，選用低電壓（100V）和大電流（1～2A），通電45min轉(zhuǎn)移即可完成。此階段分離的蛋白質(zhì)條帶肉眼仍不可見(jiàn)。3.酶免疫定位。將印有蛋白質(zhì)條帶的硝酸纖維素膜（相當(dāng)于包被了抗原的固相載體）依次與特異性抗體和酶標(biāo)第二抗體作用后，加入能形成不溶性顯色物的酶反應(yīng)底物，使區(qū)帶染色。常用的HRP底物為3，3，—二氨基聯(lián)苯胺（呈棕色）和4-氯-1-萘酚（呈藍(lán)紫色）。陽(yáng)性反應(yīng)的條帶清晰可辨，并可根據(jù)SDS-PAGE時(shí)加人的分子量標(biāo)準(zhǔn)，確定各組分的分子量。本法綜合了SDS-PAGE的辨力和ELISA法的高特異性和敏感性，是一個(gè)有效的分析手段，不僅廣泛應(yīng)用于分析抗原組分及其免疫活性，并可用于疾病的診斷。在**中此法作為確診試驗(yàn)?？乖?jīng)電泳轉(zhuǎn)移在硝酸纖維素膜上后，將膜切成小條，配合酶標(biāo)抗體及顯色底物制成的試劑盒可方便地在實(shí)驗(yàn)室中供檢測(cè)用。 上海**白Western Blot免疫印跡服務(wù)

上海朝瑞生物科技有限公司成立于2003-01-22，注冊(cè)資本：700-1000萬(wàn)元。該公司服務(wù)型的公司。上海朝瑞科技是一家有限責(zé)任公司企業(yè)，一直貫徹“以人為本，服務(wù)于社會(huì)”的經(jīng)營(yíng)理念;“質(zhì)量高速，誠(chéng)守信譽(yù)，持續(xù)發(fā)展”的質(zhì)量方針。公司目前擁有***員工5~10人人，具有[ "科研技術(shù)服務(wù)", "應(yīng)用技術(shù)服務(wù)", "科研成果轉(zhuǎn)化", "科學(xué)產(chǎn)品銷(xiāo)售" ]等多項(xiàng)業(yè)務(wù)。上海朝瑞科技將以真誠(chéng)的服務(wù)、創(chuàng)新的理念、***的產(chǎn)品，為彼此贏(yíng)得全新的未來(lái)！

文章來(lái)源地址: http://m.cdcfah.com/cp/491519.html