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產品關鍵詞:江蘇本地基因合成儀哪家好,基因合成儀
***更新:2020-07-03 01:20:28
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詳細說明
給予指令。為了完成自動合成,軟件應用一個包含一系列步驟的循環(huán)來完成全部化學反應。DNA合成儀操作步驟編輯以亞磷酰胺寡核苷酸合成為例介紹該類儀器的一般操作步驟。亞磷酰胺DNA合成的試劑有:保護堿基的5/—DMT,A、G、C、T亞磷酰胺單體,四唑偶聯(lián)催化劑,乙酐,N—甲基咪唑封閉試劑,三氯乙酸(TCA)脫保護溶液,12氧化混合物,乙腈清洗溶劑,氨水切除溶液。使用步驟如下:1)仔細檢查合成儀上所有試劑瓶中的試劑量,必要時換掉試劑瓶,特別注意乙腈的量,因為該溶劑用量較大。2)將標記好的清潔的收集瓶裝在合成儀上。3)將要合成的DNA序列輸入合成儀。4)檢查選擇的合成步驟是否正確。5)選擇結束方法:TritylOffAuto是儀器的原始狀態(tài),若打算以5,—DMT基團連接純化寡核苷酸,江蘇本地基因合成儀哪家好,將其轉變?yōu)門ritylOnAuto結束狀態(tài)。6)選擇結束方法,江蘇本地基因合成儀哪家好,一般為系統(tǒng)的原始狀態(tài)。7)在每個柱監(jiān)視器的Use下,輸入你所希望的保存名字。8)以代碼代替相應的DNA序列標記每一個收集瓶。9)打印出每一個柱設置的詳細資料,江蘇本地基因合成儀哪家好。10)檢查打印出來的資料是否正確。11)運行StartColumn步驟檢查每一個柱的位置,確保合成儀上合成柱處于正確的位置。12)檢查連接在合成儀上的溶劑殘留(廢液瓶)是否充滿。瓶子都要放在亞磷酰胺及儲液瓶位置上,并保持氬氣壓力以及管路清潔。江蘇本地基因合成儀哪家好
壓力管路及輸送管路DNA合成儀的一般原則需要保持內外氣體隔絕,因此無論試劑瓶、堿基瓶均需密封保持一定壓力。所有壓力管路均采用特氟龍導管,直徑為1/16—1/8吋。每個瓶子都有一個氬氣壓力管道及輸送管道進入瓶蓋插塞,對于亞磷酰胺,1—8號瓶其壓力管道也作為排氣管。氬氣管要保持在液體水平以上,而輸送管卻伸到瓶的底部。當閥門正確設置打開時,儲液瓶上部空間由氬氣加壓,液體被推進輸送管,流到其目的地。亞磷酰胺瓶排氣除了加壓外,亞磷酰胺瓶都是用壓力排氣管排氣的。把亞磷酰胺放入儀器前,要用氬氣排除空氣使其凈化。凈化是通過輸送管輸送氣體,當氣體輸送到瓶內時,空氣經壓力排氣管排出。這是由瓶子更換步驟自動完成的。廢液瓶是輸送系統(tǒng)的低壓側,必須將出口與大氣相通。要確保排氣管通到通風柜。如果排氣管阻塞,將會產生反壓,試劑和溶劑的輸送會受到抑制。 江蘇本地基因合成儀哪家好細檢查合成儀上所有試劑瓶中的試劑量,必要時換掉試劑瓶,特別注意乙腈的量,因為該溶劑用量較大。
亞磷酰胺瓶排氣除了加壓外,亞磷酰胺瓶都是用壓力排氣管排氣的。把亞磷酰胺放入儀器前,要用氬氣排除空氣使其凈化。凈化是通過輸送管輸送氣體,當氣體輸送到瓶內時,空氣經壓力排氣管排出。這是由瓶子更換步驟自動完成的。廢液瓶是輸送系統(tǒng)的低壓側,必須將出口與大氣相通。要確保排氣管通到通風柜。如果排氣管阻塞,將會產生反壓,試劑和溶劑的輸送會受到抑制。輸送電磁閥試劑輸送系統(tǒng)包括兩個試劑閥塊(8堿基儀器有3個)及2個或4個柱閥塊。閥塊控制氣體和化學試劑流入柱子及出口。除亞磷酰胺和四唑以外,試劑和溶劑都被同時輸送到所有活化柱。當有多個活化柱時,對流速的細微變化,以自動調節(jié)每個柱子的輸送次數來補償。每一個5—端口柱閥塊將流出物導入廢液口、DMT收集口,或DNA收集瓶,它也控制用于除去或沖洗柱內和柱閥塊內的試劑的氬氣。輔助真空對于閥塊的適當運行,關鍵是隔膜形成一個圓頂小空隙,每次電磁閥打開時,抽氣泵為每個閥塊提供了輔助真空,輔助真空在隔膜的螺線管一側形成,使隔膜形成一圓頂空隙。
13)如果分部收集器用來收集每個DMT脫保護步驟的流出物,確保試管充分清潔干凈,并打開分部收集器,確保DMT廢液管路通向分部收集器。14)啟動循環(huán),運行開始程序清洗試劑管路,除去原來的試劑。注意:TritylOnAuto表示在合成寡核苷酸的5’端核苷酸帶有一個DMT,并將其從固相載體上切下來,儲存在收集瓶中;TritylOffAuto表示在合成寡核苷酸的5,端核苷酸沒有保護基團,將其從固相載體上切下來,儲存在收集瓶中;TritylOnManual表示合成寡核苷酸的5’端核苷酸帶有一個DMT,寡核苷酸沒有從固相載體上切下來,而是保留在合成柱中;TritylOffManual表示在合成寡核苷酸的5,端核苷酸沒有保護基團,寡核苷酸沒有從固相載體上切下來,而是保留在合成柱中。DNA合成儀日常維護編輯1.瓶塞“O”形環(huán)一月檢查一次“O”形環(huán),**少1年更換1次。將新的備用“O”形環(huán)與儀器上的相比較,如果在“O”形環(huán)上出現(xiàn)白色沉淀,用棉花蘸取乙腈,進行清洗。更換“O”形環(huán)的步驟如下:用止血鉗夾住“O”形環(huán),從槽中取下(或用牙簽鉤下),注意不要損壞托住“O”形環(huán)的白色聚氟乙烯插塞(tefloninsert);確保插塞上沒有顆粒后,用手指將新“O”形環(huán)推進槽,進行壓力實驗。當主電源斷開時,所有的合成參數都被保留下來。
二、按試劑堿基添加方式分類,DNA合成儀可分為電磁閥氣動驅動,蠕動泵驅動兩種類型。1,電磁閥氣動驅動型:采用高于大氣壓的惰性氣體(氬氣,氮氣或氦氣)為堿基試劑溶液的驅動方式,通過微量電磁閥的開合添加試劑或堿基溶液。主要品牌包括ABI系列合成儀,oligomaker系列合成儀,biolytic系列合成儀,GE系列合成儀及mermade系列DNA合成儀等。2,采用蠕動泵驅動型:采用精密蠕動泵為堿基試劑溶液的驅動方式,通過蠕動泵驅動,滑塊的相互滑動選擇添加不同堿基試劑溶液。主要品牌包括德國POLYGEN系列DNA合成儀。三、按產物承載容器分,可分為需要一次性合成柱,無需一次性合成儀兩類。除德國polygen系列合成儀外,其它所有品牌合成儀,如,oligomaker,mermade,ASM,POLYPLEX,ABI等都使用一次性合成柱作為合成產物的承載容器。 閥塊控制氣體和化學試劑流入柱子及出口。除亞磷酰胺和四唑以外,試劑和溶劑都被同時輸送到所有活化柱。江蘇本地基因合成儀哪家好
這些參數包括儲存的DNA序列。江蘇本地基因合成儀哪家好
以亞磷酰胺寡核苷酸合成為例介紹該類儀器的一般操作步驟。亞磷酰胺DNA合成的試劑有:保護堿基的5/—DMT,A、G、C、T亞磷酰胺單體,四唑偶聯(lián)催化劑,乙酐,N—甲基咪唑封閉試劑,三氯乙酸(TCA)脫保護溶液,12氧化混合物,乙腈清洗溶劑,氨水切除溶液。使用步驟如下:1)仔細檢查合成儀上所有試劑瓶中的試劑量,必要時換掉試劑瓶,特別注意乙腈的量,因為該溶劑用量較大。2)將標記好的清潔的收集瓶裝在合成儀上。3)將要合成的DNA序列輸入合成儀。4)檢查選擇的合成步驟是否正確。5)選擇結束方法:TritylOffAuto是儀器的原始狀態(tài),若打算以5,—DMT基團連接純化寡核苷酸,將其轉變?yōu)門ritylOnAuto結束狀態(tài)。6)選擇結束方法,一般為系統(tǒng)的原始狀態(tài)。7)在每個柱監(jiān)視器的Use下,輸入你所希望的保存名字。8)以代碼代替相應的DNA序列標記每一個收集瓶。9)打印出每一個柱設置的詳細資料。10)檢查打印出來的資料是否正確。11)運行StartColumn步驟檢查每一個柱的位置,確保合成儀上合成柱處于正確的位置。12)檢查連接在合成儀上的溶劑殘留(廢液瓶)是否充滿。13)如果分部收集器用來收集每個DMT脫保護步驟的流出物,確保試管充分清潔干凈,并打開分部收集器,確保DMT廢液管路通向分部收集器。 江蘇本地基因合成儀哪家好
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