多肽是由多個(gè)氨基酸通過(guò)肽鍵連接而形成的一類化合物，普遍存在于生物體內(nèi)，上海什么是RNA合成儀，迄今在生物體內(nèi)發(fā)現(xiàn)的多肽已達(dá)數(shù)萬(wàn)種。多肽在調(diào)節(jié)機(jī)體各系統(tǒng)、***、**和細(xì)胞的功能活動(dòng)以及在生命活動(dòng)中發(fā)揮重要作用，并且常被應(yīng)用于功能分析、抗體研究，上海什么是RNA合成儀、***研發(fā)等領(lǐng)域。隨著生物技術(shù)與多肽合成技術(shù)的日臻成熟，越來(lái)越多的多肽***被開(kāi)發(fā)并應(yīng)用于臨床。多肽修飾種類繁多，可以簡(jiǎn)單劃分為后修飾和過(guò)程修飾（利用衍生化的氨基酸修飾），從修飾位點(diǎn)不同則可分為N端修飾、C端修飾、側(cè)鏈修飾、氨基酸修飾，上海什么是RNA合成儀、骨架修飾等（圖1）。作為一種改變肽鏈主鏈結(jié)構(gòu)或側(cè)鏈基團(tuán)的重要手段，多肽修飾可有效改變肽類化合物的理化性質(zhì)、增加水溶性、延長(zhǎng)體內(nèi)作用時(shí)間、改變其生物分布狀況、消除免疫原性、降低毒副作用等。本文主要介紹幾種**主要的多肽修飾策略及特點(diǎn)。1、環(huán)化環(huán)肽在生物醫(yī)學(xué)中具有諸多應(yīng)用，而且許多具有生物活性的天然多肽都是環(huán)狀多肽。由于環(huán)肽往往比線性肽更具有剛性，因此它們對(duì)消化系統(tǒng)具有極強(qiáng)的抵抗力，可以在消化道中存活，并且對(duì)靶受體表現(xiàn)出更強(qiáng)的親和力。環(huán)化是合成環(huán)狀多肽**直接的途徑，尤其對(duì)于結(jié)構(gòu)骨架較大的多肽。根據(jù)環(huán)化方式可以分為側(cè)鏈-側(cè)鏈?zhǔn)?、終端-側(cè)鏈?zhǔn)健⒔K端-終端式。氬氣管要保持在液體水平以上，而輸送管卻伸到瓶的底部。上海什么是RNA合成儀

    對(duì)流速的細(xì)微變化，以自動(dòng)調(diào)節(jié)每個(gè)柱子的輸送次數(shù)來(lái)補(bǔ)償。每一個(gè)5—端口柱閥塊將流出物導(dǎo)入廢液口、DMT收集口，或DNA收集瓶，它也控制用于除去或沖洗柱內(nèi)和柱閥塊內(nèi)的試劑的氬氣。輔助真空對(duì)于閥塊的適當(dāng)運(yùn)行，關(guān)鍵是隔膜形成一個(gè)圓頂小空隙，每次電磁閥打開(kāi)時(shí)，抽氣泵為每個(gè)閥塊提供了輔助真空，輔助真空在隔膜的螺線管一側(cè)形成，使隔膜形成一圓頂空隙。合成柱起始結(jié)合在載體（一般為CPG）上的核苷酸是裝在一次性的柱子中，除柱體外，還有2個(gè)固定過(guò)濾板和2個(gè)接頭，所有的部件都由惰性材料制成。固定過(guò)濾板是多孑L性聚苯乙烯固定在兩端蓋子中。入口和出口都是母路厄氏(1uer)接頭，與儀器的公路厄氏接頭配對(duì)。柱子是對(duì)稱的(沒(méi)有頂端和底部、前后之分)，可以以任何方式與公路厄氏接頭相連接。每一個(gè)柱子都用顏色編號(hào)，表示不同的起始核苷酸，以及有一個(gè)***的連續(xù)順序號(hào)碼。正常的流路是從底部進(jìn)入，通過(guò)向上輸送液體，使CPG顆粒上升并保持懸浮狀態(tài)。溶劑和試劑的流速已經(jīng)設(shè)置好，能使顆粒適當(dāng)?shù)鼗旌?。路?jié)流閥試劑通過(guò)底部的luer接頭，流到柱子，如果沒(méi)擰上下面的一個(gè)luer接頭，應(yīng)會(huì)在一個(gè)圓柱形的玻璃流路節(jié)流閥上發(fā)現(xiàn)。試劑通過(guò)流路節(jié)流閥中一個(gè)很小的通道流到柱子。上海什么是RNA合成儀為了能夠在將來(lái)改變酶的結(jié)構(gòu)，使其在工業(yè)上更有價(jià)值.

    異戊二烯化的蛋白質(zhì)包括酪氨酸磷酸酶、小GTP酶、協(xié)同伴侶分子、核纖層和著絲粒結(jié)合蛋白。異戊二烯化的多肽可以利用樹(shù)脂上的異戊二烯化方法或者引入半胱氨酸衍生物制備[9]。7、聚乙二醇（PEG）修飾PEG修飾可用于改善蛋白水解穩(wěn)定性、生物分布和肽的溶解度[10]。在多肽上引入PEG鏈可以改善它們的藥理性質(zhì)，也可以壓制多肽被蛋白水解酶水解。PEG多肽比普通多肽更容易通過(guò)腎小球***截面，**減少腎***率。由于PEG多肽在體內(nèi)的有效半衰期延長(zhǎng)，因此使用更低劑量、更低頻度的多肽***便可以維持正常***水平。但PEG修飾也存在負(fù)效應(yīng)。大量PEG在阻止酶降解多肽的同時(shí)也會(huì)減少多肽與目標(biāo)受體的結(jié)合。但PEG多肽的低親和力通常被其更長(zhǎng)的藥動(dòng)學(xué)半衰期抵消，通過(guò)在體內(nèi)存在更久，PEG多肽有更大可能性被目標(biāo)**吸收。因此，PEG聚合物的規(guī)格應(yīng)該針對(duì)比較好結(jié)果進(jìn)行比較好化設(shè)計(jì)。另一方面，由于腎***率降低，PEG多肽會(huì)在肝臟累積造成大分子綜合征。因此，當(dāng)多肽用于***測(cè)試時(shí)需要更加謹(jǐn)慎地設(shè)計(jì)PEG修飾。PEG修飾劑常見(jiàn)的修飾基團(tuán)大致可總結(jié)如下：氨基（-Amine）-NH2，氨甲基-CH2-NH2，羥基-OH，羧基-COOH，巰基（-Thiol），馬來(lái)酰亞胺-MAL，琥珀酰亞胺碳酸酯-SC，琥珀酰亞胺乙酸酯-SCM。

    并且能比較大限度地篩選各種新化合物及其異構(gòu)體。3、酶解法酶解法是用生物酶降解植物蛋白質(zhì)和動(dòng)物蛋白質(zhì)，獲得小分子多肽。酶解法因其多肽產(chǎn)量低、投資大、周期長(zhǎng)、污染嚴(yán)重，未能實(shí)現(xiàn)工業(yè)化生產(chǎn)。酶解法獲得的多肽能夠保留蛋白質(zhì)原有的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值，并且可以獲得比原蛋白質(zhì)更多的功能，更加綠色，更加健康。4、基因工程法基因工程法主要以DNA重組技術(shù)為基礎(chǔ)，通過(guò)合適的DNA模板來(lái)控制多肽的序列合成。有研究者通過(guò)基因工程法獲得了準(zhǔn)彈性蛋白-聚纈氨酸-脯氨酸-甘氨酸-纈氨酸-甘氨酸肽(VPGVG)。利用基因工程技術(shù)生產(chǎn)的活性多肽還有肽類***、干擾素類、白介素類、生長(zhǎng)因子類、**壞死因子、人生長(zhǎng)***，血液中凝血因子、***，**非蛋白纖溶酶原等?；蚬こ谭ê铣啥嚯木哂斜磉_(dá)定向性強(qiáng)，安全衛(wèi)生，原料來(lái)源范圍廣和成本低等優(yōu)點(diǎn)，但因存在***表達(dá)，不易分離，產(chǎn)率低的問(wèn)題，難以實(shí)現(xiàn)規(guī)?；a(chǎn)。5、發(fā)酵法發(fā)酵法是從微生物代謝產(chǎn)物中獲得多肽的方法。雖然發(fā)酵法的成本低，但其應(yīng)用范圍較窄，因?yàn)楝F(xiàn)在微生物能夠**合成的聚氨基酸只有ε-聚賴氨酸(ε-PL)、γ-聚谷氨酸(γ-PGA)和藍(lán)細(xì)菌肽。為了完成自動(dòng)合成，軟件應(yīng)用一個(gè)包含一系列步驟的循環(huán)來(lái)完成全部化學(xué)反應(yīng)。

    DNA合成儀是合成核酸序列用的，終產(chǎn)物是可以合成任意所需的核苷酸順序組合?！霸O(shè)計(jì)用于合成結(jié)構(gòu)上類似DNA或RNA的寡核苷酸的自動(dòng)化儀器。一般應(yīng)用于固相合成法，每次將一個(gè)核苷酸加到所接長(zhǎng)的寡核苷酸鏈上，加入每一個(gè)核苷酸都利用相同的化學(xué)反應(yīng)與相應(yīng)的嘌呤或嘧啶堿基衍生物作用。所用化學(xué)反應(yīng)和操作細(xì)節(jié)隨不同的儀器而改變，**廣泛應(yīng)用的方法是DNA合成的磷酸酰胺法?！盤(pán)CR儀是以模板擴(kuò)增核酸序列用的，終產(chǎn)物是大量與模板完全相同序列的片段?！昂?jiǎn)單的說(shuō)，PCR就是利用DNA聚合酶對(duì)特定基因做體外或試管內(nèi)InVitro的大量合成，基本上它是利用DNA聚合酶進(jìn)行專一性的連鎖復(fù)制。目前常用的技術(shù)，可以將一段基因復(fù)制為原來(lái)的一百億至一千億倍。根據(jù)DNA擴(kuò)增的目的和檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)，可以將PCR儀分為普通PCR儀，梯度PCR儀，原位PCR儀，實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀四類。DNA合成儀一般需堿基瓶組及試劑瓶組。上海什么是RNA合成儀

并開(kāi)拓有關(guān)人類疾病和遺傳調(diào)控的新領(lǐng)域，化學(xué)合成DNA在這一過(guò)程中將起關(guān)鍵性作用。上海什么是RNA合成儀

    對(duì)合成的引物先進(jìn)行稀釋，現(xiàn)將方法簡(jiǎn)單敘述如下：：OligoDNA中的每個(gè)脫氧核苷酸堿基的平均分子量近似為，則一條OligoDNA的分子量=堿基數(shù)×。例：您得到一管標(biāo)為5OD260的20merOligoDNA分子量=20×質(zhì)量數(shù)=5×33=165μg摩爾數(shù)=165/6490=μmol=25nmol若加除菌雙蒸水400μl溶解，則濃度為25nmol/400μl=μ，這是指在1ml體積1cm光程標(biāo)準(zhǔn)比色皿中，260nm波長(zhǎng)下吸光度為1A260的Oligo溶液定義為1OD260單位，根據(jù)此定義，1OD260單位相當(dāng)于33μg的OligoDNA，您可以根據(jù)此數(shù)據(jù)和您的OligoDNA分子量，計(jì)算得到摩爾數(shù)以計(jì)算不同摩爾濃度的溶液。3.引物序列的分子量計(jì)算公式如下：MW=（A堿基數(shù)×312）+（C堿基數(shù)×288）+（G堿基數(shù)×328）+（T堿基數(shù)×303）-61例如：引物TGGGCGGCGGTTGGTGTTACGA=1C=3G=11T=6MW=（1×312）+（3×328）+（6×303）-61=65414.裝有引物的eppendorf管一般保存于-20℃，臨用前稀釋。5.由于OligoDNA呈很輕的干膜狀附在管壁上，打開(kāi)時(shí)極易散失，所以打開(kāi)管子前請(qǐng)先離心10,000rpm,1min,然后再慢慢打開(kāi)管蓋。6.在裝有引物的eppendorf管內(nèi)加入100-500μl雙蒸水，蓋上管蓋，充分上下振蕩5-10分鐘，再次離心10,000rpm,1min。7.計(jì)算原引物管primer的濃度。上海什么是RNA合成儀

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