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所在地:上海市
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產品關鍵詞:藥用級泛解酸內酯生產
***更新:2020-06-26 08:24:15
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詳細說明
其中Kataoka M 等發(fā)現(xiàn)來源于根*農桿菌的L-泛解酸內酯水解酶有較高的活力和選擇性。Kesseler M 等對根*農桿菌lu678 的L-泛解酸內酯水解酶構建大腸工程菌并過量表達該蛋白,酶活提高了200 倍,達到600 U/g。該過程要求L-泛解酸內酯必須完全水解,才能獲得高光學純度的D-泛解酸內酯,限制了其工業(yè)應用。D-泛解酸內酯水解酶選擇性水解拆分DL-泛解酸內酯生成D-泛解酸,藥用級泛解酸內酯生產,藥用級泛解酸內酯生產,再經內酯化生成D-泛解酸內酯, 留下的L-泛解酸內酯經化學消旋化為DL-泛解酸內酯重新循環(huán)拆分。D-泛解酸內酯水解酶來源豐富,其中**常用的是鐮飽霉菌,有尖孢鐮刀菌、腐皮鐮刀菌和串珠鐮刀菌。2007 年,藥用級泛解酸內酯生產,SAKAMOTO K等利用固定化的尖孢鐮刀菌來水解拆分DL-泛解酸內酯, 固定化細胞的半衰期可以達到6 000h,經過180次重復利用后仍然保持原活力的71%,相對于游離的整細胞催化其半衰期提高了35 倍。
化學法與水解酶拆分法相結合合成D-泛解酸內酯憑借其成熟的工藝。目前在工業(yè)生產中占據***重要地位。隨著國內環(huán)保要求的日益趨嚴以及產能擴大帶來的競爭壓力,升級D-泛解酸內酯的合成工藝勢在必行。諸多的研究表明,微生物或者酶的應用有助于***、綠色地合成高光學純度的D-泛解酸內酯。內酯水解酶催化混旋泛解酸內酯的選擇性拆分已經成功地實現(xiàn)了工業(yè)生產。
而羰基還原酶、醇脫氫酶和羥基腈裂合酶等也已在化學酶法合成D-泛解酸內酯方面展現(xiàn)出了巨
大的應用潛力。后續(xù)利用基因工程、蛋白質工程以及反應工程等技術,提高酶的表達量,改善酶的催化性能,優(yōu)化催化反應條件,必將進一步提升化學酶法合成D-泛解酸內酯的技術競爭力。
D-泛解酸內酯水解酶基因,基因片段長度為1146bp,該序列同來源于尖鐮孢霉菌(F.oxysporum)AKU 3702菌株的編碼D-泛解酸內酯水解酶cDNA結構基因的同源性為90.06%.將所得片段定向克隆到pTrc99a載體中,轉化至JM109感受態(tài)細胞,篩選出了陽性克隆.經IPTG誘導陽性菌,進行SDS-PAGE電泳,檢測出在約40kD處有一蛋白表達帶.對兩株重組基因工程菌的比活力進行測定,結果分別為37U和41U.
串珠鐮孢霉菌(Fusarium moniliforme)CGMCC 0536的D-泛解酸內酯水解酶具有高度的立體選擇性,可立體專一性拆分DL-泛解酸內酯,生成D-泛解酸.
文章來源地址: http://m.cdcfah.com/cp/396733.html
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