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詳細說明
PCR 反應(yīng)的效率也會影響 Ct 值。在低效率條件下進行連續(xù)稀釋擴增,與高效率條件下相比,可能會產(chǎn)生斜率不同的標(biāo)準(zhǔn)曲線。在圖 5 中,兩個樣品(X 和 Y)分別在低效率和高效率條件下擴增,在靶濃度相同的條件下得到了不同的 Ct 值。在此示例中,盡管高效率條件(圖 5 中的藍色曲線)在高濃度時產(chǎn)生的 Ct 值更晚,但它在靶濃度低時卻更為靈敏。PCR 效率取決于實驗、預(yù)混液性能和樣品質(zhì)量。通常情況下,反應(yīng)效率在 90-110% 之間都是可以接受的,北京熒光定量PCR技術(shù)服務(wù)。另一方面,假定所有其他因素如儀器、試劑和實驗完全相同, 該效率也有助于得出***個樣品的模板量更少的結(jié)論,北京熒光定量PCR技術(shù)服務(wù)。然而,如果產(chǎn)生兩個 Ct值使用的是不同的儀器、試劑、引物和探針或反應(yīng)體積,該結(jié)論就不成立,北京熒光定量PCR技術(shù)服務(wù)。因此,只有在使用上文定義的相同反應(yīng)條件來比較實驗時,Ct ***值的比較才有意義。
轉(zhuǎn)基因:利用熒光定量PCR技術(shù)將轉(zhuǎn)基因信號擴增放大。
在環(huán)境監(jiān)測方面的應(yīng)用實時熒光定量PCR技術(shù)已經(jīng)被國內(nèi)外應(yīng)用在環(huán)境監(jiān)測中,提高了監(jiān)測水平。此項技術(shù)可以檢測河流中環(huán)境微生物隨著季節(jié)變化的情況。還可以用來對地表水和飲用水中致病菌進行檢測以便及時預(yù)告地表水污染情況以及采取相應(yīng)有效措施避免大范圍污染
儀器擺放:實時熒光定量 PCR 儀應(yīng)安放在濕度較低、灰塵較少、遠離水池的平穩(wěn)臺面上,不能有強光直射,室內(nèi)應(yīng)通風(fēng)良好,無腐蝕性氣體
產(chǎn)生的 ΔRn 值也不同。請注意,熒光信號基線屬于非模板依賴性因素,兩種預(yù)混液的基線是不同的(圖 3A)。Ct 值的變化并沒有反映出反應(yīng)系統(tǒng)的整體性能(圖 3B)。靈敏度相當(dāng)?shù)念A(yù)混液產(chǎn)生的 Ct ***值可能不同。
使用預(yù)混液 A 和預(yù)混液 B 在等量的人類 gDNA 中進行 RNase P 擴增。(A) Rn 根據(jù)循環(huán)數(shù)進行繪制,并且顯示兩個反應(yīng)的基線。(B) 對數(shù) (ΔRn) 根據(jù)循環(huán)數(shù)進行繪制。兩種預(yù)混液的閾值(綠線)設(shè)定為相同水平。對于相同濃度的靶標(biāo)而言,預(yù)混液 B 的 Ct 值 (CtB) 早于預(yù)混液 A 的相應(yīng)值 (CtA),表明預(yù)混液 B 的基線較低。使用 Applied Biosystems? 7500 實時熒光定量 PCR 系統(tǒng)執(zhí)行所有擴增。
文章來源地址: http://m.cdcfah.com/cp/366670.html
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