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給予指令。為了完成自動合成,軟件應(yīng)用一個包含一系列步驟的循環(huán)來完成全部化學反應(yīng)。DNA合成儀操作步驟編輯以亞磷酰胺寡核苷酸合成為例介紹該類儀器的一般操作步驟。亞磷酰胺DNA合成的試劑有:保護堿基的5/—DMT,A、G、C、T亞磷酰胺單體,四唑偶聯(lián)催化劑,乙酐,N—甲基咪唑封閉試劑,三氯乙酸(TCA)脫保護溶液,12氧化混合物,乙腈清洗溶劑,氨水切除溶液。使用步驟如下:1)仔細檢查合成儀上所有試劑瓶中的試劑量,必要時換掉試劑瓶,特別注意乙腈的量,因為該溶劑用量較大。2)將標記好的清潔的收集瓶裝在合成儀上。3)將要合成的DNA序列輸入合成儀。4)檢查選擇的合成步驟是否正確。5)選擇結(jié)束方法:TritylOffAuto是儀器的原始狀態(tài),若打算以5,—DMT基團連接純化寡核苷酸,將其轉(zhuǎn)變?yōu)門ritylOnAuto結(jié)束狀態(tài)。6)選擇結(jié)束方法,一般為系統(tǒng)的原始狀態(tài)。7)在每個柱監(jiān)視器的Use下,上海本地RNA合成儀哪家比較好,輸入你所希望的保存名字,上海本地RNA合成儀哪家比較好,上海本地RNA合成儀哪家比較好。8)以代碼代替相應(yīng)的DNA序列標記每一個收集瓶。9)打印出每一個柱設(shè)置的詳細資料。10)檢查打印出來的資料是否正確。11)運行StartColumn步驟檢查每一個柱的位置,確保合成儀上合成柱處于正確的位置。12)檢查連接在合成儀上的溶劑殘留(廢液瓶)是否充滿。
對合成的引物先進行稀釋,現(xiàn)將方法簡單敘述如下::OligoDNA中的每個脫氧核苷酸堿基的平均分子量近似為,則一條OligoDNA的分子量=堿基數(shù)×。例:您得到一管標為5OD260的20merOligoDNA分子量=20×質(zhì)量數(shù)=5×33=165μg摩爾數(shù)=165/6490=μmol=25nmol若加除菌雙蒸水400μl溶解,則濃度為25nmol/400μl=μ,這是指在1ml體積1cm光程標準比色皿中,260nm波長下吸光度為1A260的Oligo溶液定義為1OD260單位,根據(jù)此定義,1OD260單位相當于33μg的OligoDNA,您可以根據(jù)此數(shù)據(jù)和您的OligoDNA分子量,計算得到摩爾數(shù)以計算不同摩爾濃度的溶液。3.引物序列的分子量計算公式如下:MW=(A堿基數(shù)×312)+(C堿基數(shù)×288)+(G堿基數(shù)×328)+(T堿基數(shù)×303)-61例如:引物TGGGCGGCGGTTGGTGTTACGA=1C=3G=11T=6MW=(1×312)+(3×328)+(6×303)-61=65414.裝有引物的eppendorf管一般保存于-20℃,臨用前稀釋。5.由于OligoDNA呈很輕的干膜狀附在管壁上,打開時極易散失,所以打開管子前請先離心10,000rpm,1min,然后再慢慢打開管蓋。6.在裝有引物的eppendorf管內(nèi)加入100-500μl雙蒸水,蓋上管蓋,充分上下振蕩5-10分鐘,再次離心10,000rpm,1min。7.計算原引物管primer的濃度。
美國polyplex等。在歐洲,polygen96柱合成工作站及384柱合成塔也是較常見的工業(yè)型合成儀之一。3,大規(guī)模合成型大規(guī)模合成型主要指單柱合成產(chǎn)物量可達數(shù)克,甚至數(shù)公斤的合成儀,主要用于原料藥制備等科研或商業(yè)用途。能夠提供大規(guī)模合成儀的廠家主要為GEhealth及國產(chǎn)的pilot500。二、按試劑堿基添加方式分類,DNA合成儀可分為電磁閥氣動驅(qū)動,蠕動泵驅(qū)動兩種類型。1,電磁閥氣動驅(qū)動型:采用高于大氣壓的惰性氣體(氬氣,氮氣或氦氣)為堿基試劑溶液的驅(qū)動方式,通過微量電磁閥的開合添加試劑或堿基溶液。主要品牌包括ABI系列合成儀,oligomaker系列合成儀,biolytic系列合成儀,GE系列合成儀及mermade系列DNA合成儀等。2,采用蠕動泵驅(qū)動型:采用精密蠕動泵為堿基試劑溶液的驅(qū)動方式,通過蠕動泵驅(qū)動,滑塊的相互滑動選擇添加不同堿基試劑溶液。主要品牌包括德國POLYGEN系列DNA合成儀。三、按產(chǎn)物承載容器分,可分為需要一次性合成柱,無需一次性合成儀兩類。除德國polygen系列合成儀外,其它所有品牌合成儀,如,oligomaker,mermade,ASM,POLYPLEX,ABI等都使用一次性合成柱作為合成產(chǎn)物的承載容器。
文章來源地址: http://m.cdcfah.com/cp/339439.html
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