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給予指令。為了完成自動(dòng)合成,軟件應(yīng)用一個(gè)包含一系列步驟的循環(huán)來(lái)完成全部化學(xué)反應(yīng)。DNA合成儀操作步驟編輯以亞磷酰胺寡核苷酸合成為例介紹該類儀器的一般操作步驟。亞磷酰胺DNA合成的試劑有:保護(hù)堿基的5/—DMT,A、G、C、T亞磷酰胺單體,四唑偶聯(lián)催化劑,乙酐,N—甲基咪唑封閉試劑,三氯乙酸(TCA)脫保護(hù)溶液,12氧化混合物,乙腈清洗溶劑,氨水切除溶液。使用步驟如下:1)仔細(xì)檢查合成儀上所有試劑瓶中的試劑量,必要時(shí)換掉試劑瓶,特別注意乙腈的量,因?yàn)樵撊軇┯昧枯^大。2)將標(biāo)記好的清潔的收集瓶裝在合成儀上。3)將要合成的DNA序列輸入合成儀。4)檢查選擇的合成步驟是否正確。5)選擇結(jié)束方法:TritylOffAuto是儀器的原始狀態(tài),若打算以5,—DMT基團(tuán)連接純化寡核苷酸,將其轉(zhuǎn)變?yōu)門(mén)ritylOnAuto結(jié)束狀態(tài)。6)選擇結(jié)束方法,一般為系統(tǒng)的原始狀態(tài),北京新品基因合成儀廠家供應(yīng)。7)在每個(gè)柱監(jiān)視器的Use下,輸入你所希望的保存名字。8)以代碼代替相應(yīng)的DNA序列標(biāo)記每一個(gè)收集瓶。9)打印出每一個(gè)柱設(shè)置的詳細(xì)資料。10)檢查打印出來(lái)的資料是否正確,北京新品基因合成儀廠家供應(yīng)。11)運(yùn)行StartColumn步驟檢查每一個(gè)柱的位置,北京新品基因合成儀廠家供應(yīng),確保合成儀上合成柱處于正確的位置。12)檢查連接在合成儀上的溶劑殘留(廢液瓶)是否充滿。
同時(shí)搭配2-多個(gè)特殊堿基瓶位,用于熒光標(biāo)記等合成。壓力管路及輸送管路DNA合成儀的一般原則需要保持內(nèi)外氣體隔絕,因此無(wú)論試劑瓶、堿基瓶均需密封保持一定壓力。所有壓力管路均采用特氟龍導(dǎo)管,直徑為1/16—1/8吋。每個(gè)瓶子都有一個(gè)氬氣壓力管道及輸送管道進(jìn)入瓶蓋插塞,對(duì)于亞磷酰胺,1—8號(hào)瓶其壓力管道也作為排氣管。氬氣管要保持在液體水平以上,而輸送管卻伸到瓶的底部。當(dāng)閥門(mén)正確設(shè)置打開(kāi)時(shí),儲(chǔ)液瓶上部空間由氬氣加壓,液體被推進(jìn)輸送管,流到其目的地。亞磷酰胺瓶排氣除了加壓外,亞磷酰胺瓶都是用壓力排氣管排氣的。把亞磷酰胺放入儀器前,要用氬氣排除空氣使其凈化。凈化是通過(guò)輸送管輸送氣體,當(dāng)氣體輸送到瓶?jī)?nèi)時(shí),空氣經(jīng)壓力排氣管排出。這是由瓶子更換步驟自動(dòng)完成的。廢液瓶是輸送系統(tǒng)的低壓側(cè),必須將出口與大氣相通。要確保排氣管通到通風(fēng)柜。如果排氣管阻塞,將會(huì)產(chǎn)生反壓,試劑和溶劑的輸送會(huì)受到抑制。輸送電磁閥試劑輸送系統(tǒng)包括兩個(gè)試劑閥塊(8堿基儀器有3個(gè))及2個(gè)或4個(gè)柱閥塊。閥塊控制氣體和化學(xué)試劑流入柱子及出口。除亞磷酰胺和四唑以外,試劑和溶劑都被同時(shí)輸送到所有活化柱。當(dāng)有多個(gè)活化柱時(shí),對(duì)流速的細(xì)微變化。
輸送電磁閥試劑輸送系統(tǒng)包括兩個(gè)試劑閥塊(8堿基儀器有3個(gè))及2個(gè)或4個(gè)柱閥塊。閥塊控制氣體和化學(xué)試劑流入柱子及出口。除亞磷酰胺和四唑以外,試劑和溶劑都被同時(shí)輸送到所有活化柱。當(dāng)有多個(gè)活化柱時(shí),對(duì)流速的細(xì)微變化,以自動(dòng)調(diào)節(jié)每個(gè)柱子的輸送次數(shù)來(lái)補(bǔ)償。每一個(gè)5—端口柱閥塊將流出物導(dǎo)入廢液口、DMT收集口,或DNA收集瓶,它也控制用于除去或沖洗柱內(nèi)和柱閥塊內(nèi)的試劑的氬氣。輔助真空對(duì)于閥塊的適當(dāng)運(yùn)行,關(guān)鍵是隔膜形成一個(gè)圓頂小空隙,每次電磁閥打開(kāi)時(shí),抽氣泵為每個(gè)閥塊提供了輔助真空,輔助真空在隔膜的螺線管一側(cè)形成,使隔膜形成一圓頂空隙。
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