實(shí)時(shí)熒光定量PCR具有靈敏度高、特異性高和精確性高的優(yōu)點(diǎn)，此項(xiàng)技術(shù)已被應(yīng)用于分子生物學(xué)，天津病原微生物熒光定量PCR課題承包、醫(yī)學(xué)、食品檢測(cè)和環(huán)境監(jiān)測(cè)等多個(gè)領(lǐng)域 。在分子生物學(xué)領(lǐng)域的研究應(yīng)用  定量核酸濃度：傳統(tǒng)方法是用瓊脂糖凝膠電泳或者分光光度計(jì)測(cè)定核酸濃度，其結(jié)果不準(zhǔn)確而且易污染，實(shí)時(shí)熒光定量PCR可以解決這些問(wèn)題，天津病原微生物熒光定量PCR課題承包，它的準(zhǔn)確性、靈敏度高且無(wú)污染，對(duì)一些傳染性疾病進(jìn)行定量分析、病原微生物和***含量檢測(cè)，此項(xiàng)技術(shù)都是優(yōu)先

研究基因表達(dá)：應(yīng)用實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)可以對(duì)基因時(shí)間、空間表達(dá)水平差異進(jìn)行比較。例如，對(duì)特定基因用物理，天津病原微生物熒光定量PCR課題承包、化學(xué)、***等不同方法處理后的差異進(jìn)行比較，為人們的科學(xué)研究提供依據(jù)

PCR 反應(yīng)的效率也會(huì)影響 Ct 值。在低效率條件下進(jìn)行連續(xù)稀釋擴(kuò)增，與高效率條件下相比，可能會(huì)產(chǎn)生斜率不同的標(biāo)準(zhǔn)曲線。在圖 5 中，兩個(gè)樣品（X 和 Y）分別在低效率和高效率條件下擴(kuò)增，在靶濃度相同的條件下得到了不同的 Ct 值。在此示例中，盡管高效率條件（圖 5 中的藍(lán)色曲線）在高濃度時(shí)產(chǎn)生的 Ct 值更晚，但它在靶濃度低時(shí)卻更為靈敏。PCR 效率取決于實(shí)驗(yàn)、預(yù)混液性能和樣品質(zhì)量。通常情況下，反應(yīng)效率在 90-110% 之間都是可以接受的。另一方面，假定所有其他因素如儀器、試劑和實(shí)驗(yàn)完全相同， 該效率也有助于得出***個(gè)樣品的模板量更少的結(jié)論。然而，如果產(chǎn)生兩個(gè) Ct值使用的是不同的儀器、試劑、引物和探針或反應(yīng)體積，該結(jié)論就不成立。因此，只有在使用上文定義的相同反應(yīng)條件來(lái)比較實(shí)驗(yàn)時(shí)，Ct ***值的比較才有意義。

為了正確地評(píng)估 PCR 效率，至少需要 3 次重復(fù)和至少 5 個(gè)數(shù)量級(jí)倍數(shù)的模板濃度。圖 6 說(shuō)了建議此精確級(jí)別的理由，它證明在 1 個(gè)數(shù)量級(jí)倍數(shù)與 5 個(gè)數(shù)量級(jí)倍數(shù)范圍內(nèi)測(cè)試稀釋模板時(shí)，獲得的斜率或效率可能產(chǎn)生數(shù)學(xué)偏差。因此，即使檢測(cè) ** 有效，由于每個(gè)稀釋點(diǎn)都存在標(biāo)準(zhǔn)差，檢測(cè)一個(gè)數(shù)量級(jí)倍數(shù)的連續(xù)稀釋時(shí)，可能獲得 70 至 170% 的范圍。在 5 個(gè)數(shù)量級(jí)倍數(shù)范圍內(nèi)做相同數(shù)量的稀釋點(diǎn)或重復(fù)，可能的偏移只有 ±8%。這意味著在 5 個(gè)數(shù)量級(jí)倍數(shù)范圍內(nèi)，如果效率為 94%，則該實(shí)驗(yàn)的效率范圍介于 88% 到 ** 之間。為了準(zhǔn)確測(cè)定 PCR 反應(yīng)的效率，必須進(jìn)行 5 個(gè)數(shù)量級(jí)倍數(shù)的連續(xù)稀釋。-3.3 ±10% 的斜率意味著效率達(dá)到 ** ±±10%。PCR 反應(yīng)效率越低，那么靈敏度越低。

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