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CTAB法是提取DNA主要的方法,其他方法還有生物方式:酶法,化學(xué)方式如異硫氰酸胍法、堿裂解法,物理方式如玻璃珠法、超聲波法、研磨法、凍融法。 細(xì)胞器DNA、細(xì)胞核DNA。 單鏈環(huán)狀、雙鏈線性、雙鏈環(huán)狀。 組織DNA,長(zhǎng)沙全血核酸提取直銷廠家、細(xì)胞懸液DNA、、細(xì)菌DNA、質(zhì)粒DNA、真核生物DNA、細(xì)菌DNA。 提取原則 1.應(yīng)當(dāng)將如蛋白質(zhì)、多糖和脂類分子等其他生物大分子的污染應(yīng)降低到Zdi程度。 2.應(yīng)當(dāng)盡可能去除如RNA的其他核酸分子。 3,長(zhǎng)沙全血核酸提取直銷廠家,長(zhǎng)沙全血核酸提取直銷廠家.使核酸一級(jí)結(jié)構(gòu)的完整性得以保證。 4.不應(yīng)當(dāng)有對(duì)酶有壓抑作用的有機(jī)溶劑和過高濃度的金屬離子存在于核酸樣品中。核酸提取通過微生物檢測(cè)和量化監(jiān)測(cè)食品和水安全。長(zhǎng)沙全血核酸提取直銷廠家
和有傳統(tǒng)DNA提取方法相比較,磁珠法核酸提取具有無法比擬的優(yōu)勢(shì),其主要體現(xiàn)在一下四個(gè)方面: 1.安全無毒,傳統(tǒng)方法中的苯、氯仿等有毒試劑不會(huì)使用,將實(shí)驗(yàn)操作人員的傷害減到Z少,對(duì)于現(xiàn)代環(huán)保理念非常的符合。 2.磁珠與核酸的特異性結(jié)合增加了核酸的濃度,提高了核酸的純度。 3.可以使自動(dòng)化、大批量操作得以實(shí)現(xiàn),到目前為止,96孔的核酸自動(dòng)提取儀已經(jīng)有了,使用一個(gè)樣品的提取時(shí)間就能夠使96個(gè)樣品的處理得以實(shí)現(xiàn),對(duì)于生物學(xué)高通量的操作要求非常符合,可以快速及時(shí)的應(yīng)對(duì)傳染性疾病的爆發(fā)。 4.節(jié)省使用時(shí)間,有著簡(jiǎn)單的操作流程,大多數(shù)能夠在36-40min內(nèi)完成整個(gè)提取流程。廣州全血核酸提取核酸提取也便于后面的純化操作以及獲得更純的核酸。
核酸提取與純化介紹: 核酸提取是分子生物學(xué)的基本組成部分,因高質(zhì)量的核酸是分子生物學(xué)上的應(yīng)用至關(guān)重要。 我們將會(huì)總結(jié)一些現(xiàn)用核酸提取技術(shù)和針對(duì)樣品類型選擇正確提取方法的小建議;也會(huì)提及評(píng)估核酸濃度和質(zhì)量,以及核酸提取過程中的常見問題。 a. 為什么需要核酸提取 核酸提取為大量較廣研究和應(yīng)用提供了答案(例如:克隆、qRT-PCR和全基因組、轉(zhuǎn)錄組范疇中的二代測(cè)序技術(shù)),獲得的核酸可以多種方式進(jìn)行應(yīng)用。 準(zhǔn)確的研究目的,決定了要提取的核酸類型;核酸的應(yīng)用往往影響提取方法的選擇。(例如:標(biāo)準(zhǔn)的End-point PCR反應(yīng),不需要與全基因組測(cè)序?qū)嶒?yàn)相同的DNA質(zhì)量) 為了確定好佳的研究方法,有必要清楚了解核酸的下游應(yīng)用以及任何與樣品類型相關(guān)的潛在限制。(例如,臨床樣品采集量往往有限,核酸提取存在挑戰(zhàn)。) 雖然依據(jù)樣品類型,細(xì)胞裂解方式不同,但整體的核酸提取中心原則不變:細(xì)胞或組織樣品裂解,去除非核酸污染物(例如,蛋白質(zhì)等)。
核酸抽提原理:去污劑則是通過使蛋白質(zhì)變性,破壞膜結(jié)構(gòu)及解開與核酸相連接的蛋白質(zhì),從而實(shí)現(xiàn)核酸游離在裂解體系中。裂解體系中還可能加入蛋白酶;利用蛋白酶將蛋白質(zhì)消化成小的片段,促進(jìn)核酸與蛋白質(zhì)的分開,同時(shí),也便于后面的純化操作以及獲得更純的核酸。也有直接使用高濃度的蛋白質(zhì)變性劑 (如GIT、GuHCl 等) 裂解的,該方法已經(jīng)成為了 RNA 抽提的主流,卻不是基因組 DNA 抽提的主流。好常用的純化方法,一是PC 抽提 + 醇沉淀,二是介質(zhì)純化。第一種方法是利用 PC對(duì)裂解體系進(jìn)行反復(fù)抽提以去除蛋白質(zhì),實(shí)現(xiàn)核酸與蛋白質(zhì)的分離;再用醇將核酸沉淀下來,實(shí)現(xiàn)核酸與鹽的分離。核酸提取主要是利用共價(jià)閉合環(huán)狀質(zhì)粒與線性染色質(zhì)在拓?fù)鋵W(xué)上的差異來分離他們。
提取方法: 1.表面活性劑快速制備法 使用Triton X-100A或NP40表面活性劑對(duì)細(xì)胞破碎,然后使用蛋白酶K或酚將蛋白去除,使用乙醇沉淀或透析。 2.加熱法快速制備 溫度96℃-100℃加熱5min,之后離心后取上清,能夠在PCR反應(yīng)時(shí)使用。 3.堿變性快速制備 首先使用NaOH作用20min,再將HCI加入中和,離心后取上清,含有少量DNA。 4.玻璃棒纏繞法 使用鹽酸胍對(duì)細(xì)胞進(jìn)行裂解,在乙醇上鋪上裂解物,然后在界面使用帶鉤或U型玻璃棒輕攪,在玻棒繞DNA沉淀液,使得80kbDNA生成。核酸提取儀大屏幕全中文顯示;觸屏式操作,簡(jiǎn)單易用。長(zhǎng)沙自動(dòng)核算提取設(shè)備哪家好
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介質(zhì)可以分為兩大類,一類是柱式的,即介質(zhì)被預(yù)先裝填在下面是通的柱子里;另外一類則是顆粒狀(如Glassmilk、磁性小珠等)。顆粒狀的介質(zhì)的純化操作與經(jīng)典的醇沉淀差別不大,都是通過數(shù)次的加液-倒液過程,干燥后,溶解即可獲得純化好的核酸。柱式純化的操作雖然也是有加液-倒液過程,但因?yàn)榧尤氲囊后w通過離心后會(huì)進(jìn)入另外一個(gè)離心管中,與含有核酸的柱子完全是分開的,所以洗滌更徹底,操作更省力 (不用操心將核酸倒掉了,或者液體的殘留)。不過,介質(zhì)純化方法的成本是好高的。長(zhǎng)沙全血核酸提取直銷廠家
文章來源地址: http://m.cdcfah.com/cp/2437128.html
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