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70%酒精2.實驗步驟(1)實驗開始前將RNA提取液于65℃水浴鍋中預(yù)熱,離心管中加入ME(巰基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)(2)取約(液體培養(yǎng)獲得的菌絲用真空抽濾即可!固體培養(yǎng)就更好說了),在液氮中迅速磨成精細粉末,裝入50mL離心管,按1g材料8mL的量加入預(yù)熱的RNA提取液,顛倒混勻(3)65℃水浴3-10min,期間混勻2-3次(4)加入等體積的酚(注意是酸酚):氯仿:異戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5min)(5)取上清,等體積的氯仿:異戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5min)(6)加入1/4V體積10MLiCl溶液,海南正規(guī)RNA合成儀品牌企業(yè),4℃放置6h以上(或過夜)(7)10,000rpm,4℃離心20min(8)棄上清,用500ulSSTE溶解沉淀(9)酚:氯仿:異戊醇(25:24:1)抽提兩次,氯仿:異戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)(10)加2V體積的無水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上(11)12,海南正規(guī)RNA合成儀品牌企業(yè),000rpm,海南正規(guī)RNA合成儀品牌企業(yè),4℃離心20min(12)棄上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥(13)加200ul的DEPC處理水溶解(14)用非變性瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計掃描檢測RNA的質(zhì)量(在抽提過程中,若蛋白質(zhì)含量或其它的雜質(zhì)還較多,可以增加抽提次數(shù))注意:提取RNA請盡量在低溫下操作,如果條件不容許。
11、為了確保合成儀上合成柱處于正確的位置,運行StartColumn步驟對每一個柱的位置進行檢查。12、對是否充滿連接在合成儀上的溶劑殘留(廢液瓶)進行檢查。13、保證試管充分清潔干凈,保證DMT廢液管路通向分部收集器。14、將循環(huán)啟動,運行開始程序?qū)υ噭┕苈愤M行清洗,將原來的試劑除去。日常維護1.流路節(jié)流閥應(yīng)該1個月清洗1次節(jié)流閥,以避免阻塞,清洗時,先在水中煮沸15min,然后再在甲醇中超聲波清洗。2.儲液瓶需要保持氬氣壓力以及管路清潔。瓶子在亞磷酰胺及儲液瓶位置上放置。3.瓶塞“O”形環(huán)zhi少對“O”形環(huán)一月檢查一次,1年更換1次。比較儀器上的“O”形環(huán)與新的備用“O”形環(huán),若有白色沉淀出現(xiàn)在“O”形環(huán)上,用棉花蘸取乙腈進行清洗。
然而個別基因的合成占到大部分,參考價值很有限。因此使用“基因合成試劑盒”對于需要作本地基因合成的實驗者而言可能給是一個相當不錯的決定?;蚝铣傻膬?yōu)點1、自然界中很難獲得甚至不存在的基因能夠按照研究人員自己的意愿設(shè)計得到。2、通過密碼子優(yōu)化基因合成的基因,能夠在各種生物表達體系中使基因都能得到良好表達。3、只有很短的合成周期,能夠使序列的***正確得到保證。4、能夠修改基因序列和基因的酶切位點,為下游的克隆和實驗提供了便利,具有的靈活性更加的大?;蚝铣傻膽?yīng)用1、對合成DNA疫苗進行設(shè)計。2、對用于微芯片的cDNA進行大量的合成。3、對重組抗體或人鼠抗體進行顆粒。4、對不同的基因突變株、SNPS、或其它突變株進行合成。
文章來源地址: http://m.cdcfah.com/cp/212652.html
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