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產(chǎn)品關(guān)鍵詞:江蘇四色免疫組化分析服務(wù)
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5、免疫組化技術(shù)掌握與否的鑒定標準是同一切片或不同切片中不同抗原均從摸索濃度或條件而做出優(yōu)良的染色切片。我發(fā)現(xiàn)許多研究生把網(wǎng)上或者說明書摸索的反應(yīng)條件、濃度、方法步驟,重復(fù)運用于同一性質(zhì)的切片和同一種抗體,做出來后就覺得自己已經(jīng)掌握了免疫組化方法,更換一種抗體后,居然連二抗的種屬來源都拿錯了。失敗往往促進你去思考試驗原理和過程,成功有時也讓自己很自傲,江蘇四色免疫組化分析服務(wù)。6、免疫組化的應(yīng)用***,是當前實驗研究的**重要方法之一。如今發(fā)SCI論文時,明顯感覺*靠量化的數(shù)據(jù)來發(fā)文章很難,加一些形態(tài)學(xué)數(shù)據(jù)或圖片,老外十分歡迎,可能是怕你學(xué)術(shù)造假吧。當然也不能做假陽性或假陰性結(jié)果。7、實驗方法需要動手和動腦。經(jīng)過了反復(fù)的動手和動腦,把理論原理運用于實踐,在把實踐中發(fā)現(xiàn)的問題帶到理論知識中去解決,**終把理論與實踐融會貫通。必要時去各大論壇或者一些**公司尋求幫助,個人感覺上海舜田生物技術(shù)支持不錯,服務(wù)質(zhì)量也很好。下面先介紹下免疫組化的概念和常用方法,江蘇四色免疫組化分析服務(wù),以便讓大家對免疫組化更深入地理解和掌握,江蘇四色免疫組化分析服務(wù)。概念和常用方法介紹1、定義用標記的特異性抗體對組織切片或細胞標本中某些化學(xué)成分的分布和含量進行組織和細胞原位定性、定位或定量研究。
抗體和抗原之間的結(jié)合具有高度的特異性,免疫組織化學(xué)正是利用了這一原理。先將組織或細胞中的某種化學(xué)物質(zhì)提取出來,以此作為抗原或半抗原,通過免疫動物后獲得特異性的抗體,再以此抗體去探測組織或細胞中的同類的抗原物質(zhì)。由于抗原與抗體的復(fù)合物是無色的,因此還必須借助于組織化學(xué)的方法將抗原抗體結(jié)合的部位顯示出來,以其達到對組織或細胞中的未知抗原進行定性,定位或定量的研究。免疫組織化學(xué)技術(shù)按照標記物的種類可分為免疫熒光法、免疫酶法、免疫鐵蛋白法、免疫金法及放射免疫自顯影法等。這些常用免疫組織化學(xué)方法的原理如下:免疫熒光細胞化學(xué)技術(shù)將已知抗體標上熒光素,以此作為探針檢查細胞或組織內(nèi)的相應(yīng)抗原,在熒光顯微鏡下觀察.當抗原抗體復(fù)合物中的熒光素受激發(fā)光的照射后會發(fā)出一定波長的熒光。
是分泌性蛋白檢測優(yōu)先方法之一。下面介紹下免疫組化方法的具體實驗流程步驟。實驗流程簡介一、SP三步法1)石蠟切片,常規(guī)脫蠟至水。2)(無色液體)孵育10-30分鐘,以滅活內(nèi)源性過氧化物酶活性。3)蒸餾水沖洗,PBS浸泡5分鐘4)候選步驟:采用抗原修復(fù):微波(建議30分鐘內(nèi)4次中火)、高壓、酶修復(fù)方法。自然冷卻,再用3分鐘×3次.5)血清封閉:室溫15-30分鐘,盡可能與二抗來源一致。傾去,勿洗。6)滴加適當比例稀釋的一抗,37℃孵育2~3小時或4℃過夜(比較好復(fù)溫)。PBS沖洗,3分鐘×5次。7)滴加生物素標記的二抗,室溫或37℃孵育30分鐘-1h。8)PBS沖洗,3分鐘×5次。9)滴加SP(鏈霉親和素-過氧化物酶),室溫或37℃孵育30分鐘-1h。10)PBS沖洗,3分鐘×5次。11)顯色劑顯色(DAB等)。12)自來水充分沖洗。13)可進行復(fù)染,脫水,透明。14)選擇適當?shù)姆馄瑒┓馄?。二、即用型二步?)脫蠟、水化組織切片。2)根據(jù)所應(yīng)用的一抗的特殊要求,對組織切片進行預(yù)處理。3),以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶,PBS或TBS沖洗。4)滴加一抗,室溫或37℃孵育30~60分鐘,或4℃過夜,PBS或TBS浸洗3分鐘×5次。5)滴加enhangcer增強劑,37℃30min,PBS或TBS浸洗3分鐘×5次。
文章來源地址: http://m.cdcfah.com/cp/208085.html
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