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11、為了確保合成儀上合成柱處于正確的位置,運(yùn)行StartColumn步驟對(duì)每一個(gè)柱的位置進(jìn)行檢查。12、對(duì)是否充滿連接在合成儀上的溶劑殘留(廢液瓶)進(jìn)行檢查。13、保證試管充分清潔干凈,保證DMT廢液管路通向分部收集器。14、將循環(huán)啟動(dòng),運(yùn)行開(kāi)始程序?qū)υ噭┕苈愤M(jìn)行清洗,北京好RNA合成儀生產(chǎn)廠家,將原來(lái)的試劑除去。日常維護(hù)1.流路節(jié)流閥應(yīng)該1個(gè)月清洗1次節(jié)流閥,以避免阻塞,清洗時(shí),先在水中煮沸15min,然后再在甲醇中超聲波清洗。2.儲(chǔ)液瓶需要保持氬氣壓力以及管路清潔,北京好RNA合成儀生產(chǎn)廠家。瓶子在亞磷酰胺及儲(chǔ)液瓶位置上放置。3.瓶塞“O”形環(huán)zhi少對(duì)“O”形環(huán)一月檢查一次,1年更換1次,北京好RNA合成儀生產(chǎn)廠家。比較儀器上的“O”形環(huán)與新的備用“O”形環(huán),若有白色沉淀出現(xiàn)在“O”形環(huán)上,用棉花蘸取乙腈進(jìn)行清洗。
美國(guó)polyplex等。在歐洲,polygen96柱合成工作站及384柱合成塔也是較常見(jiàn)的工業(yè)型合成儀之一。3,大規(guī)模合成型大規(guī)模合成型主要指單柱合成產(chǎn)物量可達(dá)數(shù)克,甚至數(shù)公斤的合成儀,主要用于原料藥制備等科研或商業(yè)用途。能夠提供大規(guī)模合成儀的廠家主要為GEhealth及國(guó)產(chǎn)的pilot500。二、按試劑堿基添加方式分類(lèi),DNA合成儀可分為電磁閥氣動(dòng)驅(qū)動(dòng),蠕動(dòng)泵驅(qū)動(dòng)兩種類(lèi)型。1,電磁閥氣動(dòng)驅(qū)動(dòng)型:采用高于大氣壓的惰性氣體(氬氣,氮?dú)饣蚝猓閴A基試劑溶液的驅(qū)動(dòng)方式,通過(guò)微量電磁閥的開(kāi)合添加試劑或堿基溶液。主要品牌包括ABI系列合成儀,oligomaker系列合成儀,biolytic系列合成儀,GE系列合成儀及mermade系列DNA合成儀等。2,采用蠕動(dòng)泵驅(qū)動(dòng)型:采用精密蠕動(dòng)泵為堿基試劑溶液的驅(qū)動(dòng)方式,通過(guò)蠕動(dòng)泵驅(qū)動(dòng),滑塊的相互滑動(dòng)選擇添加不同堿基試劑溶液。主要品牌包括德國(guó)POLYGEN系列DNA合成儀。三、按產(chǎn)物承載容器分,可分為需要一次性合成柱,無(wú)需一次性合成儀兩類(lèi)。除德國(guó)polygen系列合成儀外,其它所有品牌合成儀,如,oligomaker,mermade,ASM,POLYPLEX,ABI等都使用一次性合成柱作為合成產(chǎn)物的承載容器。
對(duì)合成的引物先進(jìn)行稀釋?zhuān)F(xiàn)將方法簡(jiǎn)單敘述如下::OligoDNA中的每個(gè)脫氧核苷酸堿基的平均分子量近似為,則一條OligoDNA的分子量=堿基數(shù)×。例:您得到一管標(biāo)為5OD260的20merOligoDNA分子量=20×質(zhì)量數(shù)=5×33=165μg摩爾數(shù)=165/6490=μmol=25nmol若加除菌雙蒸水400μl溶解,則濃度為25nmol/400μl=μ,這是指在1ml體積1cm光程標(biāo)準(zhǔn)比色皿中,260nm波長(zhǎng)下吸光度為1A260的Oligo溶液定義為1OD260單位,根據(jù)此定義,1OD260單位相當(dāng)于33μg的OligoDNA,您可以根據(jù)此數(shù)據(jù)和您的OligoDNA分子量,計(jì)算得到摩爾數(shù)以計(jì)算不同摩爾濃度的溶液。3.引物序列的分子量計(jì)算公式如下:MW=(A堿基數(shù)×312)+(C堿基數(shù)×288)+(G堿基數(shù)×328)+(T堿基數(shù)×303)-61例如:引物TGGGCGGCGGTTGGTGTTACGA=1C=3G=11T=6MW=(1×312)+(3×328)+(6×303)-61=65414.裝有引物的eppendorf管一般保存于-20℃,臨用前稀釋。5.由于OligoDNA呈很輕的干膜狀附在管壁上,打開(kāi)時(shí)極易散失,所以打開(kāi)管子前請(qǐng)先離心10,000rpm,1min,然后再慢慢打開(kāi)管蓋。6.在裝有引物的eppendorf管內(nèi)加入100-500μl雙蒸水,蓋上管蓋,充分上下振蕩5-10分鐘,再次離心10,000rpm,1min。7.計(jì)算原引物管primer的濃度。
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