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產(chǎn)品關(guān)鍵詞:天津長(zhǎng)條帶Western Blot實(shí)驗(yàn)外包,western blot
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當(dāng)前位置:首頁(yè)?產(chǎn)品供應(yīng)?農(nóng)業(yè)?農(nóng)林牧漁項(xiàng)目合作?天津長(zhǎng)條帶Western Blot實(shí)驗(yàn)外包 **** 上海朝瑞生物科技供應(yīng)
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全自動(dòng)western blot無(wú)需凝膠、無(wú)需轉(zhuǎn)印,放入您的樣品,按個(gè)按鈕,然后就沒(méi)事了。首先,將樣品與Simple
Western樣品緩沖液混合,至終濃度1 μg/μL,還原并變性,然后將制備好的樣品、一抗和二抗、化學(xué)發(fā)光底物分配到384孔分析板的指定孔中。之后,將Simple
Western分析緩沖液、毛細(xì)管和制備好的分析板放入Simon內(nèi),它自動(dòng)開(kāi)展所有分析步驟。當(dāng)?shù)鞍籽刂?xì)管內(nèi)一個(gè)堆積和分離基質(zhì)遷移時(shí),它們分離。分離后的蛋白固定到毛細(xì)管壁上。之后利用一抗鑒定目標(biāo)蛋白,用HRP結(jié)合的二抗和化學(xué)發(fā)光底物檢測(cè)蛋白。系統(tǒng)自動(dòng)報(bào)告檢測(cè)蛋白的分子量和信號(hào)。每次實(shí)驗(yàn)可同時(shí)分析**多12個(gè)樣品,結(jié)果可在3-5小時(shí)內(nèi)獲得。15-150 kDa的目標(biāo)蛋白均可檢測(cè)。軟件報(bào)告每個(gè)檢測(cè)蛋白的分子量、面積、面積百分比和信噪比。對(duì)于傳統(tǒng)的Western blot而言,結(jié)果的重復(fù)性一直是個(gè)挑戰(zhàn),天津長(zhǎng)條帶Western Blot實(shí)驗(yàn)外包,因?yàn)槿狈?biāo)準(zhǔn)化的操作,且多個(gè)操作步驟引入了實(shí)驗(yàn)可變性,天津長(zhǎng)條帶Western Blot實(shí)驗(yàn)外包。而Simple Western分析是完全自動(dòng)化的,天津長(zhǎng)條帶Western Blot實(shí)驗(yàn)外包,因此結(jié)果的重復(fù)性更好。整體的定量也**改善了,因?yàn)槭∪チ宿D(zhuǎn)印步驟,從而避免了蛋白轉(zhuǎn)移的不一致。 天津長(zhǎng)條帶Western Blot實(shí)驗(yàn)外包
1.為SDS—聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)??乖鹊鞍讟悠方?jīng)SDS處理后帶陰電荷,在聚丙烯酰膪凝膠中從陰極向陽(yáng)極泳動(dòng),分子量越小,泳動(dòng)速度就越快。此階段分離效果肉眼不可見(jiàn)(只有在染色后才顯出電泳區(qū)帶)。2.電轉(zhuǎn)移。將在凝膠中已經(jīng)分離的條帶轉(zhuǎn)移至硝酸纖維素膜上,選用低電壓(100V)和大電流(1~2A),通電45min轉(zhuǎn)移即可完成。此階段分離的蛋白質(zhì)條帶肉眼仍不可見(jiàn)。3.酶免疫定位。將印有蛋白質(zhì)條帶的硝酸纖維素膜(相當(dāng)于包被了抗原的固相載體)依次與特異性抗體和酶標(biāo)第二抗體作用后,加入能形成不溶性顯色物的酶反應(yīng)底物,使區(qū)帶染色。常用的HRP底物為3,3,—二氨基聯(lián)苯胺(呈棕色)和4-氯-1-萘酚(呈藍(lán)紫色)。陽(yáng)性反應(yīng)的條帶清晰可辨,并可根據(jù)SDS-PAGE時(shí)加人的分子量標(biāo)準(zhǔn),確定各組分的分子量。本法綜合了SDS-PAGE的辨力和ELISA法的高特異性和敏感性,是一個(gè)有效的分析手段,不僅廣泛應(yīng)用于分析抗原組分及其免疫活性,并可用于疾病的診斷。在**中此法作為確診試驗(yàn)。抗原經(jīng)電泳轉(zhuǎn)移在硝酸纖維素膜上后,將膜切成小條,配合酶標(biāo)抗體及顯色底物制成的試劑盒可方便地在實(shí)驗(yàn)室中供檢測(cè)用。 天津長(zhǎng)條帶Western Blot實(shí)驗(yàn)外包
收集蛋白樣品(Protein sample preparation)
可以使用適當(dāng)?shù)牧呀庖海琖estern及IP細(xì)胞裂解液、RIPA裂解液等,裂解貼壁細(xì)胞、懸浮細(xì)胞或組織樣品。對(duì)于某些特定的亞細(xì)胞組份蛋白,例如細(xì)胞**白、細(xì)胞漿蛋白、線粒體蛋白等,可以參考相關(guān)文獻(xiàn)提取這些亞細(xì)胞組份蛋白,也可以使用試劑盒進(jìn)行抽提。收集完蛋白樣品后,為確保每個(gè)蛋白樣品的上樣量一致,需要測(cè)定每個(gè)蛋白樣品的蛋白濃度。根據(jù)所使用的裂解液的不同,需要采用適當(dāng)?shù)牡鞍诐舛葴y(cè)定方法。因?yàn)椴煌牡鞍诐舛葴y(cè)定方法對(duì)于一些去垢劑和還原劑等的兼容性差別很大。如果使用Western及IP細(xì)胞裂解液或RIPA裂解液,可以使用BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒
免疫印跡法(immunoblotting )因與Southern早先建立的檢測(cè)核酸的印跡方法Southern
blot相類似,亦被稱為Western blot。免疫印跡(western blotting)是在蛋白質(zhì)電泳分離和抗原抗體檢測(cè)的基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)一項(xiàng)檢測(cè)蛋白質(zhì)的技術(shù)。它將SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳的辨力與抗原抗體反應(yīng)的特異性相結(jié)合。典型的印跡實(shí)驗(yàn)包括三個(gè)步驟①蛋白質(zhì)的電泳分離;②將電泳后凝膠上的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移至固體膜上,用非特異性,非反應(yīng)活性分子封閉固體膜上未吸附蛋白質(zhì)區(qū)域;③免疫學(xué)檢測(cè)。免疫印跡克服了聚丙烯酰胺凝膠電泳后直接在凝膠上進(jìn)行免疫學(xué)分析的弊端,極大地提高了其利用率、分辨率和靈敏度,使其成為使用**的免疫化學(xué)方法之一。
轉(zhuǎn)膜完畢后,立即把蛋白膜放置到預(yù)先準(zhǔn)備好的Western洗滌液(P0023C)中,漂洗1-2分鐘,以洗去膜上的轉(zhuǎn)膜液。從轉(zhuǎn)膜完畢后所有的步驟,一定要注意膜的保濕,避免膜的干燥,否則極易產(chǎn)生較高的背景。用微型臺(tái)式真空泵或滴管等吸盡封閉液,立即加入稀釋好的一抗,室溫或4℃在側(cè)擺搖床上緩慢搖動(dòng)孵育一小時(shí)。如果一抗孵育一小時(shí)效果不佳,可以4℃緩慢搖動(dòng)孵育過(guò)夜?;蚋鼡?jù)抗體的說(shuō)明選擇適當(dāng)?shù)姆跤郎囟群蜁r(shí)間。微型臺(tái)式真空泵或滴管等吸盡洗滌液,立即加入稀釋好的二抗,室溫或4℃在側(cè)擺搖床上緩慢搖動(dòng)孵育一小時(shí)。 回收二抗。加入Western洗滌液,在側(cè)擺搖床上緩慢搖動(dòng)洗滌5-10分鐘。吸盡洗滌液后,再加入洗滌液洗滌5-10分鐘。共洗滌3次。如果結(jié)果背景較高可以適當(dāng)延長(zhǎng)洗滌時(shí)間并增加洗滌次數(shù)。使用
ECL化學(xué)發(fā)光試劑來(lái)檢測(cè)蛋白。壓片可以采用**的壓片暗盒進(jìn)行。洗片時(shí)可以使用X光片自動(dòng)洗片機(jī)。如果沒(méi)有自動(dòng)洗片機(jī),可以用顯影定影試劑盒自行配制顯影液和定影液進(jìn)行手工洗片。X光片推薦選用柯達(dá)原裝的生物實(shí)驗(yàn)**柯達(dá)X-OMAT BT膠片。 天津長(zhǎng)條帶Western Blot實(shí)驗(yàn)外包
天津長(zhǎng)條帶Western Blot實(shí)驗(yàn)外包
國(guó)外化工企業(yè)在發(fā)展過(guò)程中也經(jīng)歷了被社會(huì)“誤解”的過(guò)程,但通過(guò)長(zhǎng)期堅(jiān)持安全環(huán)保標(biāo)準(zhǔn)和公開(kāi)透明的溝通機(jī)制,**終取得了全社會(huì)的信任。我國(guó)化工產(chǎn)業(yè)轉(zhuǎn)型升級(jí),要重視通過(guò)環(huán)保標(biāo)準(zhǔn)和法律法規(guī)引導(dǎo)企業(yè)減量、達(dá)標(biāo)排放,實(shí)現(xiàn)綠色發(fā)展。有限責(zé)任公司企業(yè)普遍把研發(fā)創(chuàng)新能力看作企業(yè)**重要的重點(diǎn)競(jìng)爭(zhēng)力,加大研發(fā)進(jìn)度、提升科技水平,并積極構(gòu)建開(kāi)放性和國(guó)際化的創(chuàng)新體系??蒲屑夹g(shù)服務(wù),應(yīng)用技術(shù)服務(wù),科研成果轉(zhuǎn)化,科學(xué)產(chǎn)品銷(xiāo)售的發(fā)展任務(wù)是提升示范升級(jí)水平、解決環(huán)保問(wèn)題,關(guān)注競(jìng)爭(zhēng)力,努力實(shí)現(xiàn)相關(guān)產(chǎn)業(yè)融合發(fā)展。服務(wù)型的優(yōu)化有力地拉動(dòng)了化工產(chǎn)業(yè)的市場(chǎng)需求,產(chǎn)業(yè)總體規(guī)模迅速擴(kuò)大,領(lǐng)域不斷拓展、結(jié)構(gòu)逐步調(diào)整、整體水平有較大提升,運(yùn)行質(zhì)量和效益進(jìn)一步提高。天津長(zhǎng)條帶Western Blot實(shí)驗(yàn)外包
上海朝瑞生物科技有限公司位于上海市松江區(qū)廣富林路697號(hào)昂立大廈2113室。公司業(yè)務(wù)涵蓋科研技術(shù)服務(wù),應(yīng)用技術(shù)服務(wù),科研成果轉(zhuǎn)化,科學(xué)產(chǎn)品銷(xiāo)售等,價(jià)格合理,品質(zhì)有保證。公司從事化工多年,有著創(chuàng)新的設(shè)計(jì)、強(qiáng)大的技術(shù),還有一批**的專業(yè)化的隊(duì)伍,確保為客戶提供良好的產(chǎn)品及服務(wù)。在社會(huì)各界的鼎力支持下,持續(xù)創(chuàng)新,不斷鑄造***服務(wù)體驗(yàn),為客戶成功提供堅(jiān)實(shí)有力的支持。
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