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多肽是由多個(gè)氨基酸通過(guò)肽鍵連接而形成的一類化合物,普遍存在于生物體內(nèi),迄今在生物體內(nèi)發(fā)現(xiàn)的多肽已達(dá)數(shù)萬(wàn)種。多肽在調(diào)節(jié)機(jī)體各系統(tǒng)、***、**和細(xì)胞的功能活動(dòng)以及在生命活動(dòng)中發(fā)揮重要作用,并且常被應(yīng)用于功能分析、抗體研究、***研發(fā)等領(lǐng)域。隨著生物技術(shù)與多肽合成技術(shù)的日臻成熟,越來(lái)越多的多肽***被開發(fā)并應(yīng)用于臨床。多肽修飾種類繁多,可以簡(jiǎn)單劃分為后修飾和過(guò)程修飾(利用衍生化的氨基酸修飾),從修飾位點(diǎn)不同則可分為N端修飾、C端修飾、側(cè)鏈修飾、氨基酸修飾、骨架修飾等(圖1)。作為一種改變肽鏈主鏈結(jié)構(gòu)或側(cè)鏈基團(tuán)的重要手段,海南什么是RNA合成儀哪里有,多肽修飾可有效改變肽類化合物的理化性質(zhì)、增加水溶性、延長(zhǎng)體內(nèi)作用時(shí)間、改變其生物分布狀況、消除免疫原性、降低毒副作用等。本文主要介紹幾種**主要的多肽修飾策略及特點(diǎn)。1、環(huán)化環(huán)肽在生物醫(yī)學(xué)中具有諸多應(yīng)用,海南什么是RNA合成儀哪里有,海南什么是RNA合成儀哪里有,而且許多具有生物活性的天然多肽都是環(huán)狀多肽。由于環(huán)肽往往比線性肽更具有剛性,因此它們對(duì)消化系統(tǒng)具有極強(qiáng)的抵抗力,可以在消化道中存活,并且對(duì)靶受體表現(xiàn)出更強(qiáng)的親和力。環(huán)化是合成環(huán)狀多肽**直接的途徑,尤其對(duì)于結(jié)構(gòu)骨架較大的多肽。根據(jù)環(huán)化方式可以分為側(cè)鏈-側(cè)鏈?zhǔn)健⒔K端-側(cè)鏈?zhǔn)?、終端-終端式。
使用可選擇性移除保護(hù)基團(tuán)的絲氨酸、蘇氨酸和酪氨酸殘基可以實(shí)現(xiàn)選擇性磷酸化。一些磷?;噭┮部赏ㄟ^(guò)后修飾在多肽中引入磷酸基團(tuán)[5]。近年來(lái),有學(xué)者使用化學(xué)選擇性的Staudinger-亞磷酸酯反應(yīng)實(shí)現(xiàn)了賴氨酸的位點(diǎn)特異性磷酸化(圖3)4、豆蔻?;妥貦磅;弥舅狨;疦末端可以讓多肽或蛋白質(zhì)與細(xì)胞膜結(jié)合。N末端上豆蔻?;男蛄锌梢允筍rc家族的蛋白激酶和逆轉(zhuǎn)錄酶Gaq蛋白靶向結(jié)合細(xì)胞膜。利用標(biāo)準(zhǔn)的偶聯(lián)反應(yīng)即可將豆蔻酸連接到樹脂-多肽的N末端,生成的脂肽可在標(biāo)準(zhǔn)條件下解離并通過(guò)RP-HPLC純化。5、糖基化糖肽類如萬(wàn)古霉素和***拉寧是***耐藥細(xì)菌傳染的重要***,其他糖肽常被用于刺激免疫系統(tǒng)。另外,由于很多微生物抗原是糖基化的,因此研究糖肽對(duì)提高傳染的***效果具有重要意義。另一方面,有研究發(fā)現(xiàn)**細(xì)胞細(xì)胞膜上的蛋白質(zhì)表現(xiàn)出異常的糖基化,這使得糖肽在**和**免疫防御研究中也發(fā)揮著重要作用。糖肽的制備一般利用Fmoc/t-Bu方法。糖基化殘基,比如蘇氨酸和絲氨酸常通過(guò)五氟苯酚酯活化的Fmoc保護(hù)糖基化氨基酸引入到多肽中。6、異戊二烯化異戊二烯化發(fā)生在C末端附近側(cè)鏈上的半胱氨酸殘基。蛋白質(zhì)的異戊二烯化可以提高細(xì)胞膜親和性,形成蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用。
手工測(cè)序以及自動(dòng)測(cè)序均屬于DNA序列測(cè)定,手工測(cè)序可分為maxam-gilbert化學(xué)降解法與sanger雙脫氧鏈終止法,事實(shí)上,目前dna序列分析的主流是自動(dòng)測(cè)序。373型、377型、310型、3700和3100型等多種型號(hào)DNA測(cè)序儀均已經(jīng)被美國(guó)peabi公司生產(chǎn)出來(lái)了,在這幾款DNA測(cè)序儀中,臨床檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室使用**多的一種型號(hào)要屬310型。發(fā)展歷史70年代末,化學(xué)法和雙脫氧手動(dòng)測(cè)序,同位素標(biāo)記法分別由WalterGilbert與FrederickSanger發(fā)明出來(lái)。80年代中期,應(yīng)用雙脫氧終止法原理,自動(dòng)測(cè)序儀出現(xiàn)了,同位素被熒光取代了,計(jì)算機(jī)圖象識(shí)別。90年代中期,測(cè)序儀得到了重大改進(jìn),凝膠電泳由集束化的毛細(xì)管電泳取代了。2001年,人類基因組框架圖被完成。注意事項(xiàng)1.bigdye熒光標(biāo)記終止底物循環(huán)測(cè)序試劑盒為本實(shí)驗(yàn)使用的測(cè)序試劑盒,通常650bp左右為可測(cè)dna長(zhǎng)度,(±)%為本儀器dna測(cè)序精確度,如果儀器所需測(cè)定的長(zhǎng)度高于650bp,不能辨讀的堿基n<2%,那么就需要設(shè)計(jì)另外的引物。能夠設(shè)計(jì)反向引物對(duì)同一模板進(jìn)行測(cè)序,相互印證以便確保更為準(zhǔn)確地測(cè)序。能夠人工核對(duì)n堿基,有時(shí)能夠?qū)⑵浔孀x出來(lái),為了使測(cè)序的精確度提高,按照星號(hào)提示位置,能夠?qū)υ撎幉噬珗D譜進(jìn)行人工分析,進(jìn)一步核對(duì)該處堿基。
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