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并且能比較大限度地篩選各種新化合物及其異構(gòu)體。3、酶解法酶解法是用生物酶降解植物蛋白質(zhì)和動(dòng)物蛋白質(zhì),獲得小分子多肽。酶解法因其多肽產(chǎn)量低、投資大、周期長、污染嚴(yán)重,未能實(shí)現(xiàn)工業(yè)化生產(chǎn)。酶解法獲得的多肽能夠保留蛋白質(zhì)原有的營養(yǎng)價(jià)值,并且可以獲得比原蛋白質(zhì)更多的功能,更加綠色,更加健康。4,江蘇進(jìn)口RNA合成儀廠商、基因工程法基因工程法主要以DNA重組技術(shù)為基礎(chǔ),通過合適的DNA模板來控制多肽的序列合成。有研究者通過基因工程法獲得了準(zhǔn)彈性蛋白-聚纈氨酸-脯氨酸-甘氨酸-纈氨酸-甘氨酸肽(VPGVG)。利用基因工程技術(shù)生產(chǎn)的活性多肽還有肽類***、干擾素類、白介素類、生長因子類、**壞死因子、人生長***,血液中凝血因子、***,**非蛋白纖溶酶原等?;蚬こ谭ê铣啥嚯木哂斜磉_(dá)定向性強(qiáng),安全衛(wèi)生,原料來源范圍廣和成本低等優(yōu)點(diǎn),江蘇進(jìn)口RNA合成儀廠商,但因存在***表達(dá),不易分離,產(chǎn)率低的問題,難以實(shí)現(xiàn)規(guī)?;a(chǎn)。5、發(fā)酵法發(fā)酵法是從微生物代謝產(chǎn)物中獲得多肽的方法,江蘇進(jìn)口RNA合成儀廠商。雖然發(fā)酵法的成本低,但其應(yīng)用范圍較窄,因?yàn)楝F(xiàn)在微生物能夠**合成的聚氨基酸只有ε-聚賴氨酸(ε-PL)、γ-聚谷氨酸(γ-PGA)和藍(lán)細(xì)菌肽。
DNA和RNA提取方法一、DNA的提取(方法一)1.實(shí)驗(yàn)試劑(1)DNA提取液:Tris HCl(pH),NaCl,EDTA,1%SDS(2)3MNaAc(3)TE:10mmol/LTris-HClmmol/LEDTA(4)酚():氯仿:異戊醇(25:24:1)(5)氯仿:異戊醇(24:1)(6)異丙醇(7)無水乙醇(8)75%乙醇(9)RNaseA2.實(shí)驗(yàn)步驟(1)取菌絲,在液氮中迅速研磨成粉(2)加入4mL提取液,快速振蕩混勻(3)加入等體積的4mL的氯仿:異戊醇(24:1),渦旋3~5min(此處是粗提沒有加酚,可以節(jié)約成本)(4)1000rpm,4℃,5min(5)上清用氯仿:異戊醇(24:1)再抽提一次(10,000rpm,4℃離心5min)(6)取上清,加入2/3倍體積的-20℃預(yù)冷異丙醇或,混勻,靜置約30min(7)用毛細(xì)玻棒挑出絮狀沉淀,用75%乙醇反復(fù)漂洗數(shù)次,再用無水乙醇漂洗1次,吹干,重懸于500ulTE中(8)加入1ulRNaseA(10mg/mL),37℃處理1h(9)用酚():氯仿:異戊醇(25:24:1)和氯仿:異戊醇(24:1)各抽提1次(10,000rpm,4℃離心5min)(10)取上清,1/10V3MNaAc,℃沉淀30min以上(11)沉淀用75%乙醇漂洗,風(fēng)干,溶于200ulTE中,-20℃保存?zhèn)溆枚?、DNA的提取(方法二)1.菌絲2.加入3mL65℃預(yù)熱的DNA提取緩沖液,快速振蕩混勻65℃水浴30min,期間混勻2-3次3.加入1mL5MKAc,冰浴20min4.氯仿:異戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃離心5min)5.取上清。
用還原性斷裂法把多肽同高聚物分離,再用色層法提純。固相法的建立和應(yīng)用**地促進(jìn)了多肽合成研究。多肽合成方法分類多肽的合成主要分為兩條途徑:化學(xué)合成多肽和生物合成多肽?;瘜W(xué)合成主要是以氨基酸與氨基酸之間縮合的形式來進(jìn)行。在合成含有特定順序的多肽時(shí),由于多肽合成原料中含有官能度大于2的氨基酸單體,多肽合成時(shí)應(yīng)將不需要反應(yīng)的基團(tuán)暫時(shí)保護(hù)起來,方可進(jìn)行成肽反應(yīng),這樣保證了多肽合成目標(biāo)產(chǎn)物的定向性。多肽的化學(xué)合成又分為液相合成和固相合成。多肽液相合成主要分為逐步合成和片段組合兩種策略。逐步合成簡潔迅速,可用于各種生物活性多肽片段的合成。片段組合法主要包括天然化學(xué)連接和施陶丁格連接。近年,多肽液相片段合成法發(fā)展迅速,在多肽和蛋白質(zhì)合成領(lǐng)域已取得了重大突破。在多肽片段合成法中,根據(jù)多肽片段的化學(xué)特定性或化學(xué)選擇性,多肽片段能夠自發(fā)進(jìn)行連接,得到目標(biāo)多肽。因?yàn)槎嚯钠魏械陌被釟埢鄬^少,所以純度較高,且易于純化。1963年,美國***生物化學(xué)家Merrifield提出了固相合成法,開展了多肽固相合成,即將氨基酸的C末端(羧基端)連接在不溶樹脂上,然后在此樹脂上依次進(jìn)行氨基酸的縮合、延長肽鏈。
文章來源地址: http://m.cdcfah.com/cp/115494.html
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