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產(chǎn)品關(guān)鍵詞:江蘇9分鐘完成RNA提取試劑盒500T/5865元,RNA提取試劑盒
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RNA 常用提取方法(1)
1、異硫氰酸胍氯化銫超速離心法:
原理:使用蛋白質(zhì)變性劑異硫氰酸胍有效制抑RN A 酶的活性,經(jīng)過(guò)起始密度為1.78g/m l 的氯化銫介質(zhì),進(jìn)行密度梯度超速離心,RNA沉淀于管底,而DNA與蛋白質(zhì)在上清中。使用這種方法,不但能得到高質(zhì)量的RNA ,而且能同時(shí)分離出細(xì)胞染色體DNA。
2、鹽酸胍-有機(jī)溶劑法:
原理:本法有MacDonald1987年在Strohman報(bào)道的方法基礎(chǔ)上改進(jìn)而成的,適用于沒(méi)有超速離心及設(shè)備的情況下提取細(xì)胞總RNA。它利用鹽酸胍制抑RNA酶,勻漿裂解細(xì)胞,有機(jī)溶劑抽提去除蛋白質(zhì),通過(guò)選擇性沉淀RNA分子而去除DNA。
3,江蘇9分鐘完成RNA提取試劑盒500T/5865元、氯化鋰-尿素法:
原理:本法首先由Auffray報(bào)道,利用高濃度尿素變性蛋白質(zhì)同時(shí)制抑RNA酶,3 mol/L LiCl選擇性沉淀RNA,江蘇9分鐘完成RNA提取試劑盒500T/5865元,江蘇9分鐘完成RNA提取試劑盒500T/5865元。
凡知醫(yī)學(xué)基于自主創(chuàng)新的試劑凍干技術(shù)、等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)、微流控芯片技術(shù)等開(kāi)發(fā)了一體化基因快速檢測(cè)儀。江蘇9分鐘完成RNA提取試劑盒500T/5865元
RNA提取注意事項(xiàng)(1):
迅速滅活內(nèi)源的RNA酶,以防止RNA降解。 以下3個(gè)方法均可有效使內(nèi)源RNA酶失活: 1)用含離液(如胍鹽)的細(xì)胞裂解液收獲樣品,并立即勻漿。 2)用液氮瞬間凍結(jié)樣品。值得特別注意的是:組織塊必須保證足夠小,在浸入液氮的瞬間就能凍結(jié),以確保瞬間令RNA酶失活。3)立即將樣品置于RNAfixer無(wú)液氮RNA樣品儲(chǔ)存液中。它是一種水相、的收集試劑,能立即穩(wěn)定并保護(hù)完整、未凍結(jié)的組織和細(xì)胞樣品中的RNA。關(guān)鍵要點(diǎn)是組織樣品切片一定要夠薄(<0.5 cm),這樣RNAfixer才能在RNase破壞RNA之前迅速滲入組織塊中。 江蘇9分鐘完成RNA提取試劑盒500T/5865元將吸附柱放入新管中,向膜中央滴加50-100ul RNase free ddH2O。
蛋白和多糖污染可能的原因如下:
樣品中蛋白和多糖含量高,建議加入氯仿之前先高速離心去除蛋白和多糖。
吸取上層無(wú)色水相時(shí)不小心吸入一些中間蛋白層的物質(zhì),建議將移液***頭中的液體放回分層的離心管中,重新進(jìn)行離心后再小心吸取上層水相即可。
樣品量太大,裂解不完全也會(huì)導(dǎo)致 RNA 樣品中蛋白和多糖污染。
A260/A280 的比值低于 1.65
可能的原因如下:1、RNA 樣品溶于 TE 溶液,低離子濃度和低 pH 條件下,A280 的數(shù)值會(huì)較高, 導(dǎo)致比值低。
樣品勻漿時(shí)加的 Trizol 試劑量太少。
勻漿后樣品未在室溫放置 5 分鐘,會(huì)導(dǎo)致蛋白的析出不完全,也會(huì)增加 A280的數(shù)值。
***得到的 RNA 沉淀溶解不完全。
SimplyP 總RNA提取試劑
把總RNA提取速度提高3倍,僅9分鐘內(nèi)完成!
產(chǎn)品特點(diǎn):
1.速度快:9分鐘內(nèi)可獲得RNA。
2.步驟少:4步即可完成。
3.操作簡(jiǎn)單:SimplyP試劑盒內(nèi)只有四種試劑,僅需經(jīng)過(guò)裂解、吸附過(guò)濾、洗滌、洗脫即可,提純整個(gè)操作過(guò)程簡(jiǎn)單易行,且提取的RNA質(zhì)量不受操作者熟練程度的影響。
4.適用范圍廣:可用于組織、全血、體液、骨髓、細(xì)胞等樣品,且試劑盒中有可徹底滅活病原體的試劑,對(duì)于具有潛在傳染性的臨床樣本RNA的提取,有安全、可靠、不產(chǎn)生交叉污染的特殊優(yōu)勢(shì)。
5.保質(zhì)期長(zhǎng):由于本試劑盒采用的裂解液是中性的,沒(méi)有腐蝕性,且不易變質(zhì),使得該試劑盒可室溫保存兩年。 使用時(shí)一定要根據(jù)自己的實(shí)驗(yàn)需要購(gòu)買(mǎi)專(zhuān)用提取試劑盒, 如果不是專(zhuān)用試劑盒。
可選步驟: 4℃ 12,000 rpm (~13,400×g) 離心5分鐘,取上清,轉(zhuǎn)入一個(gè)新的無(wú)RNase 的離心管中。
注意:如果樣品中含有較多蛋白、脂肪、多糖或肌肉、植物結(jié)節(jié)部分等,可加此步驟離心去除。離心得到的沉淀中包括細(xì)胞外膜、多糖、高分子量DNA,RNA存在于上清溶液中。
加入200 μl 氯仿,蓋好管蓋,劇烈振蕩15 s,室溫放置3 min。
4℃ 12,000 rpm (~13,400×g) 離心10 min,樣品會(huì)分成三層:黃色的有機(jī)相,中間層和無(wú)色的水相,RNA 主要在水相中,水相的體積約為所用溶液 RL試劑的60%。把水相轉(zhuǎn)移到新管中,進(jìn)行下一步操作。***次使用前應(yīng)在溶液 RPI、溶液 RW中加入無(wú)水乙醇,加入量請(qǐng)參見(jiàn)瓶上標(biāo)簽。 取新鮮或-70℃凍存100mg**在液氮中研磨,把粉末加入到1ml裂解液中混勻。天津操作簡(jiǎn)單RNA提取試劑盒QQ 804036498
或許能提出RNA,但不能確保其質(zhì)量以及完整性,會(huì)影響RT-PCR。江蘇9分鐘完成RNA提取試劑盒500T/5865元
向吸附柱中加入600ul漂洗液(使用前請(qǐng)先檢查是否已加入無(wú)水乙醇),2-8 12,000 rpm ℃ 離心2min,棄廢液。
向吸附柱中加入600ul漂洗液,2-8 12,000 rpm ℃ 離心2min,棄廢液。
12000rpm離心2min,棄掉收集管,將吸附柱置于室溫放置數(shù)分鐘將吸附柱中殘余的漂洗液去除。
將吸附柱放入新管中,向膜中央滴加50-100ul RNase free ddH2O,室溫放置5min,12000rpm室溫離心2min即得到RNA
所有相關(guān)器皿耗材都應(yīng)為RNase-free產(chǎn)品,操作過(guò)程要小心,帶口罩、手套避免環(huán)境中RNA酶污染樣品。
上海朝瑞生物科技有限公司創(chuàng)辦于2003-01-22,是一家服務(wù)型的公司。經(jīng)過(guò)多年不斷的歷練探索和創(chuàng)新發(fā)展,公司是一家有限責(zé)任公司企業(yè),以誠(chéng)信務(wù)實(shí)的創(chuàng)業(yè)精神、優(yōu)質(zhì)高速的管理團(tuán)隊(duì)、精悍的職工隊(duì)伍,努力為廣大用戶提供高品質(zhì)的產(chǎn)品。公司始終堅(jiān)持客戶需求優(yōu)先的原則,致力于提供高質(zhì)量的科研技術(shù)服務(wù),應(yīng)用技術(shù)服務(wù),科研成果轉(zhuǎn)化,科學(xué)產(chǎn)品銷(xiāo)售。上海朝瑞科技自成立以來(lái),一直堅(jiān)持走正規(guī)化、專(zhuān)業(yè)化路線,得到了廣大客戶及社會(huì)各界的普遍認(rèn)可與大力支持。
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